Колмакова елена: ИП Колмакова Елена Ивановна (ИНН 434589216468), ИП Колмакова Е И с реквизитами и адресом (ОГРНИП 313434514100102) на Rusprofile.ru

21.01.1983| alexxlab| 0 Comment

Колмакова елена: ИП Колмакова Елена Ивановна (ИНН 434589216468), ИП Колмакова Е И с реквизитами и адресом (ОГРНИП 313434514100102) на Rusprofile.ru

Содержание

Колмакова Елена Александровна – Учительский сайт

Мое кредо: Если работать – то хорошо!
Если быть честной – то до конца!
Если принципиальной – то в меру!
Если шутить – то к месту!
Если быть тактичной – то всегда!
Если отношение к людям – то такое,
которого хотелось бы к себе!

Мой девиз: Чтобы иметь право учить,
Надо постоянно учиться самому.

1. Не жди, что твой ребенок будет таким, как ты или таким, как ты хочешь. Помоги ему стать не тобой, а собой.
2. Не требуй от ребенка платы за все, что ты для него сделал. Ты дал ему жизнь, как он может отблагодарить тебя? Он даст жизнь другому, тот – третьему, и это необратимый закон благодарности.
3. Не вымещай на ребенке свои обиды, чтобы в старости не есть горький хлеб.

Ибо что посеешь, то и взойдет.
4. Не относись к его проблемам свысока. Жизнь дана каждому по силам и, будь уверен, ему она тяжела не меньше, чем тебе, а может быть и больше, поскольку у него нет опыта.
5. Не унижай!
6. Не забывай, что самые важные встречи человека – это его встречи с детьми. Обращай больше внимания на них – мы никогда не можем знать, кого мы встречаем в ребенке.
7. Не мучь себя, если не можешь сделать что-то для своего ребенка. Мучь, если можешь – но не делаешь. Помни, для ребенка сделано недостаточно, если не сделано все.
8. Ребенок – это не тиран, который завладевает всей твоей жизнью, не только плод плоти и крови. Это та драгоценная чаша, которую Жизнь дала тебе на хранение и развитие в нем творческого огня. Это раскрепощенная любовь матери и отца, у которых будет расти не “наш”, “свой” ребенок, но душа, данная на хранение.
9. Умей любить чужого ребенка. Никогда не делай чужому то, что не хотел бы, чтобы делали твоему.

10. Люби своего ребенка любым – неталантливым, неудачливым, взрослым. Общаясь с ним – радуйся, потому что ребенок – это праздник, который пока с тобой.

Колмакова, Елена Алексеевна – Современные методы анализа результатов контроля климата в Русском музее как основа превентивной консервации предметов национального достояния

Поиск по определенным полям

Чтобы сузить результаты поисковой выдачи, можно уточнить запрос, указав поля, по которым производить поиск. Список полей представлен выше. Например:

author:иванов

Можно искать по нескольким полям одновременно:

author:иванов title:исследование

Логически операторы

По умолчанию используется оператор AND.
Оператор AND означает, что документ должен соответствовать всем элементам в группе:

исследование разработка

author:иванов title:разработка

оператор OR означает, что документ должен соответствовать одному из значений в группе:

исследование OR разработка

author:иванов OR title:разработка

оператор NOT исключает документы, содержащие данный элемент:

исследование NOT разработка

author:иванов NOT title:разработка

Тип поиска

При написании запроса можно указывать способ, по которому фраза будет искаться.

Поддерживается четыре метода: поиск с учетом морфологии, без морфологии, поиск префикса, поиск фразы.
По-умолчанию, поиск производится с учетом морфологии.
Для поиска без морфологии, перед словами в фразе достаточно поставить знак “доллар”:

$исследование $развития

Для поиска префикса нужно поставить звездочку после запроса:

исследование*

Для поиска фразы нужно заключить запрос в двойные кавычки:

“исследование и разработка“

Поиск по синонимам

Для включения в результаты поиска синонимов слова нужно поставить решётку “#” перед словом или перед выражением в скобках.
В применении к одному слову для него будет найдено до трёх синонимов.
В применении к выражению в скобках к каждому слову будет добавлен синоним, если он был найден.

Не сочетается с поиском без морфологии, поиском по префиксу или поиском по фразе.

#исследование

Группировка

Для того, чтобы сгруппировать поисковые фразы нужно использовать скобки. Это позволяет управлять булевой логикой запроса.
Например, нужно составить запрос: найти документы у которых автор Иванов или Петров, и заглавие содержит слова исследование или разработка:

author:(иванов OR петров) title:(исследование OR разработка)

Приблизительный поиск слова

Для приблизительного поиска нужно поставить тильду “~” в конце слова из фразы. Например:

бром~

При поиске будут найдены такие слова, как “бром”, “ром”, “пром” и т.д.
Можно дополнительно указать максимальное количество возможных правок: 0, 1 или 2.

4 разработка

По умолчанию, уровень равен 1. Допустимые значения – положительное вещественное число.

Поиск в интервале

Для указания интервала, в котором должно находиться значение какого-то поля, следует указать в скобках граничные значения, разделенные оператором TO.
Будет произведена лексикографическая сортировка.

author:[Иванов TO Петров]

Будут возвращены результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, Иванов и Петров будут включены в результат.

author:{Иванов TO Петров}

Такой запрос вернёт результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, но Иванов и Петров не будут включены в результат.
Для того, чтобы включить значение в интервал, используйте квадратные скобки. Для исключения значения используйте фигурные скобки.

Курганские женщины готовятся встретить осенний сезон во всеоружии

Вторник, 31 августа, 2021, 11:16

Утро Зауралья

Елена Колмакова вышла в отставку три года назад, но практически ни дня не сидела без дела. В её плотном графике место нашлось новому увлечению – плетению из бумажной лозы.

Елена Колмакова, мастерица:

– Была в гараже и увидела отцовскую корзину. Эта корзина была сделана из лозы, у неё не было ручки, у ней не было.. во здесь вот растрескавшаяся загибка была. Я взяла лозу, подобрала по цвету, подобрала по размеру лозы натуральной, сделала ивовый прут и оплела всё это. И вот корзина. Отца уже нет в живых, а корзина его жива.

Мастерица говорит: плетение из бумажной лозы – это не только эстетическое удовольствие, но и развитие моторики.

Кроме того, хобби помогает Елене утилизировать всю ненужную бумагу в доме. А ещё это новые места для хранения. Плетеные корзины очень прочные. Им даже вода не страшна.

Елена Колмакова, мастерица:

– Сюда вот в эту корзину для пикника входит порядка 8-10 килограмм продуктов. Это очень удобно.

Елена осваивает плетение модных нынче сумок-корзинок. Экспериментирует с новыми узорами.

Елена Колмакова:

– Здесь я пробовала новые узоры плетения. Значит это вот колосок, а это вот таким вот зигзагом выплетается корзина, я посчитала, что я просто отрабатываю узор, как будет это смотреться это на ручке.

Освоить технику может каждый, уверена мастерица.

– Лоза очень мягкая, очень подвижная. Одна идет вниз лоза, другая остается наверху.

Сделать первые шаги в плетении лозы попробовали и мы.

– Теперь вот эта вниз пойдет. Всё, вы тоже плетельщица.

– Изделия ручной работы – это энергия, т.е. когда человек изготавливает, он вкладывает энергию, тепло.

Своё тепло мастерица дарит ученикам. А совсем скоро она даёт свой первый мастер-класс в культурно-историческом комплексе “Царево городище”. Будут плести подставку под горячие блюда. А пока Елена продумывает мельчайшие детали предстоящей встречи. Считает важно даже то, в чём она пойдёт на этот урок. За обновкой отправляется в “Элис”. Предпочтение отдает классическим вариантам.

Елена Колмакова:

– А еще сейчас в связи с пандемией некоторым образом изменились параметры фигуры, так еще и свободные вещи мне нравятся, более летящие, струящиеся такие. И комфортные, конечно, материалы, из которых сделаны эти вещи, конечно, они должны быть натуральные.

Впрочем, ткани, выполненные по новым технологиям, Елена тоже рассматривает. Но задает тон наряда удачный крой. Так называемый А-силуэт – пожалуй, самый универсальный. А летящие шифоны, неяркий цветочный принт помогают сломать его геометрию. Оверсайз – делает незаметным всё, что женщина хочет оставить невидимым. Ещё один вариант – платья на запАх. И, конечно, цвет. Стилисты советуют не ограничивать себя темными оттенками. К новым нарядам Елены как нельзя кстати сумка-корзинка собственного изготовления.

Ещё один тренд минувшего сезона – кожзам не теряет актуальности этой осенью, говорят в “Элис”. Адаптировать его в гардероб – задача, которую способна решить практически каждая модница.

– Это качество, это удобство, комфорт. Всё!

Выбор сделан. Теперь можно смело отправляться на мастер-класс по плетению из бумажной лозы.

ИНГА ПЕС

Колмакова Елена Александровна

Повышение квалификации и (или) профессиональная переподготовка

Курс «Образование и общество. Актуальные проблемы психологии и педагогики»

МГОСГИ

часов — 36 , год окончания 2013

Курс «Содержание и методика преподавания модуля «Основы православной культуры» в курсе ОРКСЭ»»

ГБОУ ВО МО АСОУ

часов — 72 , год окончания 2016

Курс «Образовательный процесс в начальной школе в условиях реализации ФГОС НОО»

МГОСГИ

часов — 72 , год окончания 2013

Курс «Модель организации внеурочной деятельности обучающихся в рамках реализации ФГОС»

МОУ МЦ «Раменский дом учителя»

часов — 36 , год окончания 2014

ИП Колмакова Елена Викторовна 2021

Вид деятельности ИП Колмакова Елена Викторовна 2021: Розничная торговля, кроме торговли автотранспортными средствами и мотоциклами; ремонт бытовых изделий и предметов личного пользования

ИП Колмакова Елена Викторовна 2021: адрес, телефон, факс, email, сайт

Регион: г. Абакан, Республика Хакасия

Телефон: нет данных

Факс: нет данных

E-mail: нет данных

Сайт: нет данных

График работы: Пн-Пт: 8-18, Сб-Вс: выходной

Тип: Индивидуальный предприниматель

Регистрация ИП Колмакова Елена Викторовна 2021:Дата первичной регистрации – 26 мая 2010 года. Регистратор – Межрайонная Инспекция Федеральной Налоговой Службы №1 по республике ХАКАСИЯ.

Нашли неточность в описании или хотите указать больше информации о компании? – Напишите нам!

Подробная информация об ИП Колмакова Елена Викторовна 2021: бухгалтерия, баланс. Скачать банковские реквизиты, тендеры, кредитную историю, налоги ИП Колмакова Елена Викторовна 2021.

ИП Колмакова Елена Викторовна 2021 реквизиты: ОГРНИП, ИНН, ОКПО, ОКАТО

ОГРНИП: 310190114600038

ИНН: 190107580682

ОКПО: 171572408

ОКАТО: 95401000000

Получить выписку из ЕГРИП об ИП Колмакова Елена Викторовна 2021

Виды деятельности по ОКВЭД:
Розничная торговля, кроме торговли автотранспортными средствами и мотоциклами, ремонт бытовых изделий и предметов личного пользования
Прочая розничная торговля в специализированных магазинах
Специализированная розничная торговля прочими непродовольственными товарами, не включенными в другие группировки

Работа в

ИП Колмакова Елена Викторовна 2021 вакансии, практика, стажировка, карьера

На данный момент открытых вакансий нет. Возможно вас заинтересуют вакансии в других компаниях:

Программист 1С 8.2

Продавец-консультант

Инженер-сметчик

Формовщик-упаковщик в ночь

Уборщица помещений

Авиационный техник по планеру и двигателям

Менеджер по персоналу

Менеджер по продажам (г. Березники)

Отклики и отзывы ИП Колмакова Елена Викторовна 2021

Оставить отклик для ИП Колмакова Елена Викторовна 2021 в социальных сетях. Читать отзывы об ИП Колмакова Елена Викторовна 2021

Индивидуальный предприниматель Колмакова Елена Викторовна зарегистирован и ведет свою деятельность в регионе г. Абакан, Республика Хакасия. Основная деятельность ИП Колмакова Елена Викторовна – Розничная торговля, кроме торговли автотранспортными средствами и мотоциклами; ремонт бытовых изделий и предметов личного пользования. ИП Колмакова Елена Викторовна зарегистрирован в ФНС под номером ОГРНИП: 310190114600038, ИНН: 190107580682. По данным реквизитам можно полную выписку данных из ЕГРИП. Дата первичной регистрации – 26 мая 2010 года. Регистратор – Межрайонная Инспекция Федеральной Налоговой Службы №1 по республике ХАКАСИЯ. Сведения об открытых вакансиях отсутствуют

Также смотрите индивидуальных предпринимателей с таким же видом деятельности, как ИП Колмакова Елена Викторовна 2021 конкуренты: Халикова Нина Кирилловна | Дубенскова Елена Валерьевна | Снитко Дмитрий Викторович | Столярская Галина Владимировна | Поливода Константин Владимирович

«Моя книга»: В гостях Надя Колмакова

военный, биография, драма, история

биография, драма, криминал, триллер

фантастика, комедия, боевик

комедия, криминал

детский, мультфильм

ужасы

приключения, семейный

биография, драма

боевик

драма, мелодрама

фэнтези, драма, приключения, вестерн

мультфильм, мюзикл, фэнтези, комедия, приключения, семейный

ужасы, триллер, драма, детектив

ужасы, фантастика, боевик

драма, мелодрама, комедия

биография, спорт, драма

мультфильм, фэнтези, приключения, комедия

история, драма

мультфильм, фэнтези, приключения

биография, драма, боевик

фантастика, фэнтези, боевик, драма, приключения

драма

мультфильм, фантастика, комедия, приключения, семейный

мультфильм, ужасы, фэнтези, комедия, приключения, семейный

фантастика, боевик, триллер

фантастика, драма, приключения

Автор: Колмакова Елена

Настройки конфиденциальности данных

Указанные здесь настройки сохраняются в «локальном хранилище» вашего устройства. Настройки будут сохранены в памяти при следующем посещении нашего интернет-магазина. Вы можете изменить эти настройки в любое время (значок отпечатка пальца в нижнем левом углу).

Для получения дополнительной информации о времени жизни файлов cookie и необходимых основных файлах cookie см. Уведомление о конфиденциальности.

YouTube Дальнейшая информация

Чтобы просмотреть содержимое YouTube на этом веб-сайте, вам необходимо дать согласие на передачу данных и хранение сторонних файлов cookie YouTube (Google).Это позволяет нам улучшить ваш пользовательский опыт и сделать наши сайт лучше и интереснее. Без вашего согласия никакие данные не будут переданы на YouTube. Однако вы также не сможете пользоваться услугами YouTube на этом веб-сайте.

Описание:

Встраивание видео

Процессинговая компания:

Google Inc.

Условия эксплуатации: Ссылка

Vimeo Дальнейшая информация

Чтобы просматривать содержимое Vimeo на этом веб-сайте, вам необходимо дать согласие на передача данных и хранение сторонних файлов cookie с помощью Vimeo.. Это позволяет нам улучшить вашего пользователя опыта и сделать наш сайт лучше и интереснее. Без вашего согласия никакие данные не будут быть перенесены на Vimeo. Однако вы также не сможете пользоваться услугами Vimdeo на этом веб-сайте.

Описание:

Встраивание видео

Процессинговая компания:

Vimeo

Условия эксплуатации: Ссылка

ReCaptcha Дальнейшая информация

Чтобы отправлять формы на этой странице, вам необходимо дать согласие на передачу данных и хранение сторонних файлов cookie компанией Google.С вашего согласия будет встроена reCAPTCHA, служба Google для предотвращения спама через контактные формы. Эта услуга позволяет нам предоставлять нашим клиентам безопасный способ связаться с нами через онлайн-формы. В то же время сервис не позволяет спам-ботам скомпрометировать наши сервисы. После того, как вы дадите свое разрешение, вас могут попросить ответить на запрос безопасности, чтобы отправить форму. Если вы не согласны, к сожалению, вы не сможете использовать эту форму. Пожалуйста, свяжитесь с нами другим способом.

Описание:

Остановка спам-ботов

Процессинговая компания:

Google Inc.

Условия эксплуатации: Ссылка

Диспетчер тегов Google Дальнейшая информация

Интеграция с Google Tag Manager

Описание:

Интеграция с Google Tag Manager

Процессинговая компания:

Google Ireland Limited

Условия эксплуатации: Ссылка

Sendinblue Дальнейшая информация

Для отправки данных в sendinblue вам необходимо дать согласие на передачу данных и хранение сторонних файлов cookie с помощью sendinblue. Это позволяет нам улучшить ваш пользовательский опыт и сделать наш веб-сайт лучше и интереснее.

Описание:

Отслеживание автоматизации Sendinblue

Процессинговая компания:

sendinblue

Условия эксплуатации: Ссылка

об.60, No. 4, 2015 Лимнологии и океанографии на JSTOR

Лимнология и океанография

Описание:

Лимнология и океанография ( L&O ) публикует исследовательские статьи, обзоры и комментарии по всем аспектам лимнологии и океанографии. Объединяющая тема журнала – понимание водных систем. Работы оцениваются по их оригинальности и интеллектуальному вкладу в области лимнологии и океанографии.Исследования на конкретных участках, лабораторные эксперименты и упражнения по моделированию будут рассматриваться только в той степени, в которой они способствуют более широкому пониманию водных наук.

Охват: 1956-2017 (Том 1, № 1 – Том 62, № 6)

Moving Wall: 3 года (Что такое движущаяся стена?)

“Движущаяся стена” представляет собой промежуток времени между последними выпусками имеется в JSTOR и в последнем опубликованном номере журнала.Подвижные стены обычно обозначаются годами. В редких случаях издатель решил создать “нулевую” движущуюся стену, поэтому их текущая выпуски доступны в JSTOR вскоре после публикации.
Примечание: При расчете подвижной стены текущий год не учитывается.
Например, если текущий год – 2008, а журнал имеет пятилетний движущаяся стена, доступны статьи 2002 года выпуска.

Термины, относящиеся к подвижной стене: Неподвижные стены: Журналы, в архив которых не добавляются новые тома.; Поглощено: Журналы, объединенные с другим названием.; Завершено: Журналы, которые больше не публикуются или были в сочетании с другим названием.

ISSN: 00243590

EISSN: 19395590

Тем: Экология и эволюционная биология, Водные науки, Наука и математика, Биологические науки

Коллекции: Сборник биологических наук, Коллекция “Экология и ботаника I”, Архивный журнал JSTOR и собрание первичных источников, Коллекция наук о жизни

× Закрыть оверлей

Эндогенные кардиотонические стероиды при хронической почечной недостаточности | Нефрологическая диализная трансплантация

Абстрактные

Справочная информация. Предыдущие сообщения продемонстрировали, что кардиотонические стероиды, подобные дигиталису (CTS), вносят вклад в патогенез терминальной стадии почечной недостаточности. Целью настоящего исследования было определить природу CTS у пациентов с хронической болезнью почек (CKD) и у крыс с частичной нефрэктомией (PNx).

Методы. У пациентов с ХБП и у здоровых людей мы определили уровни маринобуфагенина (МБГ) и эндогенного уабаина (ЭО) в плазме крови, а также активность Na / K-АТФазы эритроцитов в отсутствие и в присутствии моноклональных антител (mAb) против 3E9 против MBG. и Digibind.Уровни MBG и EO также определяли у крыс Sprague-Dawley, подвергшихся ложной операции, и у крыс после 4 недель PNx.

Результаты. У 25 пациентов с плазмой ХБП уровень МБГ, но не ЭО был увеличен (0,86 ± 0,07 против 0,28 ± 0,02 нмоль / л, P <0,01), а Na / K-АТФаза в эритроцитах ингибировалась (1,24 ± 0,10 против 2,80 ± 0,09 мкмоль Pi / мл / ч, P <0,01) по сравнению с 19 здоровыми людьми. Ex vivo , mAb 3E9 восстанавливали Na / K-АТФазу в эритроцитах пациентов с ХЗП, но не влияли на Na / K-АТФазу у контрольных субъектов.После хроматографического фракционирования уремической плазмы по сравнению с нормальной плазмой конкурентный иммуноанализ, основанный на mAb против MBG, обнаружил 3-кратное увеличение уровня эндогенного материала, имеющего время удерживания, подобное тому, которое наблюдается для MBG. Аналогичная картина изменения CTS наблюдалась у уремических крыс. По сравнению с ложнооперированными животными, крысы PNx демонстрировали в 3 раза повышенные уровни МБГ, но не ЭО.

Выводы. При хронической почечной недостаточности повышенные уровни буфадиенолида CTS, MBG, способствуют ингибированию Na / K-АТФазы и могут представлять собой потенциальную мишень для терапии.

Введение

Одним из факторов, влияющих на патогенез хронической почечной недостаточности, является повышенная концентрация в кровотоке эндогенных кардиотонических стероидов (CTS), то есть эндогенных лигандов Na / K-АТФазы [1, 2]. CTS, принадлежащие к классам карденолидов [например, эндогенный уабаин (ЭО)] и буфадиенолиды [например, маринобуфагенин (МБГ) и телоцинобуфагин] действуют как физиологические регуляторы активности натриевого насоса и участвуют в регуляции натрийуреза и тонуса сосудов [2].Совсем недавно было показано, что CTS вносит вклад в про-гипертрофическую и профибротическую передачу сигналов клеток [3]. Мы продемонстрировали, что у крыс с частичной нефрэктомией (PNx) диастолическая дисфункция и фиброз сердца сопровождаются повышенными уровнями МБГ в плазме; мы также отметили повышенные уровни маркеров окислительного стресса в сердце и плазме, а также другие доказательства передачи сигналов через Na / K-ATPase, такие как активация Src и MAPK [4–6]. В этих исследованиях хроническое введение МБГ нормотензивным крысам для достижения аналогичных концентраций МБГ в плазме, наблюдаемых при PNx, приводило к очень похожему сердечному фенотипу, наблюдаемому при PNx.Напротив, активная иммунизация крыс PNx против MBG резко снижает гипертрофию сердца и фиброз, а также свидетельствует о передаче сигналов Na / K-ATPase, включая снижение левого желудочка и системных уровней окислительного стресса [4–6].

Приведенные выше данные позволяют предположить, что иммунонейтрализация CTS может быть перспективной для лечения хронической болезни почек (ХБП) и уремической кардиомиопатии. Поскольку данные о природе CTS, участвующей в хронической почечной недостаточности, противоречивы [6–9], нашей целью было определить, повышается ли ЭО, МБГ или оба эти фактора при уремии.Чтобы ответить на этот вопрос, мы определили уровни CTS в плазме у пациентов с ХБП и крыс PNx с помощью иммуноанализа MBG на основе моноклональных антител (mAb) и двух тестов EO, основанных на антителах с различной перекрестной реактивностью, а также анализа с использованием Digibind. в качестве первичного антитела. Ранее было продемонстрировано, что Digibind ™ (Fab-фрагменты антител к дигоксину овцы) как связывает эндогенный CTS, так и снижает артериальное давление у пациентов с преэклампсией, синдромом, связанным с повышенным уровнем CTS [10–12].Мы также сравнили способность антител против MBG и против уабаина взаимодействовать с материалом CTS из уремической плазмы человека после его фракционирования на колонках для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой.

Методы

Исследования на людях

Протокол исследования на людях был одобрен Научным советом Медицинской академии им. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия, и институциональным наблюдательным советом Исследовательского института Медстар, Вашингтон, округ Колумбия.В это исследование были включены 25 пациентов с ХБП, проходящих лечение хроническим диализом в отделении хронического диализа Медицинской академии им. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия, и 19 здоровых добровольцев (Медицинская академия им. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия). Из пациентов 20 находились на гемодиализе (HD) и 5 на хроническом амбулаторном перитонеальном диализе (CAPD). Причиной ХБП были хронический гломерулонефрит (12 пациентов), пиелонефрит (4 пациента), поликистоз почек (4 пациента), врожденная дисплазия почек (1 пациент), сахарный диабет (3 пациента) и амилоидоз (1 пациент).Пациенты на HD получали три раза в неделю стандартный бикарбонатный диализ с синтетическими мембранами. Все пациенты, получавшие CAPD, получали четыре смены в день стандартного перитонеального диализата объемом 2 л, содержащего различные количества декстрозы (1,5, 2,5 или 4,25%) в зависимости от их объемного статуса. Двенадцать пациентов получали эритропоэтин и 16 принимали гипотензивные препараты (ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента, блокаторы кальциевых каналов, альфа- и бета-блокаторы). Ни один из испытуемых никогда не принимал препараты наперстянки.Клинические характеристики пациентов и контрольных субъектов сведены в Таблицу 1.

Таблица 1.

Характеристики испытуемыхa

	Контроль ( n = 19)	CKD ( n = 25)
Возраст (лет)	46,5 ± 2,4 52,8 ± 3,7
Пол (мужской / женский)	9/10	14/11
Масса тела (кг)	68 ± 3	71 ± 2
HD / CAPD	“> п.а.	20/5
Креатинин сыворотки (мкмоль / л)	86 ± 2	848 ± 45 *
Na сыворотки (ммоль / л)	141 ± 1	13914 ± 1
К (ммоль / л) в сыворотке крови	4,3 ± 0,1	5,3 ± 0,1 *
Систолическое артериальное давление (мм рт. Ст.)	125 ± 2	127 ± 4
Диастолическое артериальное давление (мм рт. Ст.)	76 ± 1	81 ± 3
Гипертония (да / нет)	0/19	16/9

= 19) CKD ( n = 25)

	Контроль ( n
Возраст (лет)	46.5 ± 2,4	52,8 ± 3,7
Пол (мужской / женский)	9/10	14/11
Масса тела (кг)	68 ± 3	71 ± 2
HD / CAPD	na	20/5
Креатинин сыворотки (мкмоль / л)	86 ± 2	848 ± 45 *
Na сыворотки (ммоль / л)	141 ± 1	13914 ± 1
Сыворотка К (ммоль / л)	4.3 ± 0,1	5,3 ± 0,1 *
Систолическое артериальное давление (мм рт. Ст.)	125 ± 2	127 ± 4
Диастолическое артериальное давление (мм рт.
Гипертония (да / нет)	0/19	16/9

Таблица 1.

Характеристики субъектов исследованияa

	Контроль ( n = 19)	n = 25)
Возраст (лет)	46.5 ± 2,4	52,8 ± 3,7
Пол (мужской / женский)	9/10	14/11
Масса тела (кг)	68 ± 3	71 ± 2
HD / CAPD	na	20/5
Креатинин сыворотки (мкмоль / л)	86 ± 2	848 ± 45 *
Na сыворотки (ммоль / л)	141 ± 1	13914 ± 1
Сыворотка К (ммоль / л)	4.3 ± 0,1	5,3 ± 0,1 *
Систолическое артериальное давление (мм рт. Ст.)	125 ± 2	127 ± 4
Диастолическое артериальное давление (мм рт.
Гипертония (да / нет)	0/19	16/9

	Контроль ( n = 19)	CKD ( n 9014 = 25)
Возраст (лет)	46.5 ± 2,4	52,8 ± 3,7
Пол (мужской / женский)	9/10	14/11
Масса тела (кг)	68 ± 3	71 ± 2
HD / CAPD	na	20/5
Креатинин сыворотки (мкмоль / л)	86 ± 2	848 ± 45 *
Na сыворотки (ммоль / л)	141 ± 1	13914 ± 1
Сыворотка К (ммоль / л)	4.3 ± 0,1	5,3 ± 0,1 *
Систолическое артериальное давление (мм рт. Ст.)	125 ± 2	127 ± 4
Диастолическое артериальное давление (мм рт.
Гипертония (да / нет)	0/19	16/9

Активность Na / K-АТФазы эритроцитов

Активность Na / K-АТФазы в цельных эритроцитах пациентов с ХБП и контрольных субъектов определялась, как сообщалось ранее [13].Эффекты in vitro mAb против MBG 3E9 и Digibind (Glaxo SmithKline) на Na / K-АТФазу эритроцитов изучали в эритроцитах пациентов с ХБП. Моноклональные антитела против MBG 3E9 использовали в концентрации 50 мкг / л, что, in vitro, , обращало индуцированное MBG 75% ингибирование Na / K-АТФазы в почках крыс (изоформа α-1) и in vivo снижало кровь давление у гипертонических крыс Dahl-S [14]. Дигибинд использовался в концентрации 10 мкг / мл, что находится в том же диапазоне, что и дозы Дигибинд, которые ранее применялись для лечения пациентов с преэклампсией [10–12].Аликвоты цельной крови (0,5 мл) предварительно инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин в присутствии и в отсутствие mAb 3E9 или Digibind. Эритроциты трижды промывали изотонической средой (145 ммоль / л NaCl в 20 ммоль / л Трис-буфера; pH 7,6 при 4 ° C) и определяли активность Na / K-АТФазы. Эритроциты предварительно инкубировали с Твин-20 (0,5%) в сахарозе (250 ммоль / л) и Трис-буфером (20 ммоль / л, pH 7,4, 37 ° C) в течение 30 минут и инкубировали в течение 30 минут в среде, содержащей (в ммоль / л) NaCl 100, KCl 10, MgCl ₂ 3, ЭДТА 0.5, Трис 50 и АТФ 2 (pH 7,4, 37 ° C) в конечном разведении 1:40. Реакцию останавливали добавлением трихлоруксусной кислоты до конечной концентрации 7%. Общую активность АТФазы измеряли по продукции неорганического фосфата (Pi), а активность Na / K-АТФазы оценивали как разницу между активностью АТФазы в присутствии и в отсутствие 5 ммоль / л уабаина.

Исследования на животных

Все эксперименты на животных, описанные в этой статье, проводились в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здоровья согласно протоколам, утвержденным Комитетом по уходу и использованию институциональных животных Университета Толедо.Для этих исследований использовали самцов крыс Sprague – Dawley (250–300 г). Контрольную группу составили восемь крыс с ложной нефрэктомией. У 18 крыс PNx выполняли, как описано ранее [4]. Этот маневр вызывает стойкую гипертензию в течение 2 недель. Через 5 недель после PNx этих крыс умерщвляли. Образцы плазмы хранили при -80 ° C для определения CTS. Артериальное давление определяли с использованием метода хвостовой манжеты IITC, Inc. (модель усилителя 229, модель монитора 31, испытательная камера, модель 306; IITC Life Science, Woodland Hills, CA).

Измерение креатинина

Креатинин плазмы измеряли колориметрическим методом с использованием коммерческого набора от Teco Diagnostics (№ по каталогу C515-480; Анахайм, Калифорния). Стандарты креатинина или образцы плазмы смешивали с реагентом пикриновой кислоты и реагентом креатининового буфера, входящим в комплект. Значение OD при 510 нм измеряли сразу после и через 15 мин. Различия между двумя временными точками были использованы для расчета концентраций креатинина.

Маркеры окислительного стресса

Общая концентрация карбонила белка в плазме и гомогенате левого желудочка как маркер окислительного стресса [15] была определена с помощью иммуноферментного анализа с использованием набора BIOCELL PC Test (Northwest Life Science Specialties).

Иммуноанализ CTS

Для измерения CTS образцы плазмы экстрагировали с использованием картриджей C18 SepPak (Waters Inc., Кембридж, Массачусетс) [16]. Картриджи активировали 10 мл ацетонитрила и промывали 10 мл воды.Затем образцы плазмы объемом 0,5 мл наносили на картриджи и последовательно элюировали 7 мл 20% ацетонитрила, а затем 7 мл 80% ацетонитрила в том же флаконе, что обеспечивает элюирование материала с более низкой и высокой полярностью соответственно и позволяет проводить измерения различных CTS в выборке [16]. После элюирования образцы сушили в вакууме и хранили при -50 ° C. Перед иммуноанализом образцы восстанавливали в исходном объеме буфера для анализа. MBG измеряли с помощью флюороиммуноанализа [ассоциативно-усиленный флуоресцентный иммуноанализ (DELFIA)] на основе мышиных mAb 4G4 против MBG, недавно подробно описанных [14].Этот анализ основан на конкуренции между иммобилизованным антигеном (MBG-гликозид-тиреоглобулин) и MBG, другими перекрестными реагентами или эндогенными CTS в образце за ограниченное количество сайтов связывания на mAb против MBG. Вторичное (козье антимышиное) антитело, меченное нерадиоактивным европием, было получено от Perkin-Elmer (Waltham, MA). Анализы ЭО были основаны на аналогичном принципе с использованием конъюгата уабаин-овальбумин и двух антисывороток к уабаину (анти-OU-S, 1: 100 000 и анти-OU-M, 1:20 000), полученных от кроликов, иммунизированных уабаином-бычьем. конъюгат сывороточного альбумина (BSA) (анти-OU-S) или смесь конъюгатов уабаин-BSA и уабаин-РНКаза (анти-OU-M).Уровни дигоксин-подобной иммунореактивности в плазме определяли с помощью конкурентного иммуноанализа на основе Digibind [14]. Поскольку уровни «иммунореактивности дигоксина» у индивидуума (неконцентрированные), образцы в этом анализе выходят за рамки его чувствительности, уровни дигоксин-подобного иммунореактивного материала в плазме крови пациентов с ХБП и крысами PNx были определены в образцах, которые были объединены ( n = 6), извлеченный из патронов С18 и сконцентрированный в 10 раз. Для этого иммуноанализа на дигоксин мы пометили первичное антитело (Digibind; Glaxo SmithKline, King of Prussia, PA), используя набор для маркировки европием (Perkin-Elmer).Анализ основан на конкуренции между CTS в образце и конъюгатом дигоксин-BSA, иммобилизованным на дне полосок для иммунопреципитации, за ограниченное количество сайтов связывания Digibind (0,125 мкг / лунку). Чувствительность иммуноанализа Digibind к дигоксину составила 0,01 нмоль / л. В отдельном эксперименте мы объединили аликвоты контрольных образцов плазмы объемом 50 мкл, добавили 0,25 мл образцов объединенной плазмы с увеличивающимися концентрациями МБГ (0,125–2 нмоль / л), экстрагировали образцы на картриджах C18 SepPak, как описано выше, и определили уровни МБГ и уабаин-подобной иммунореактивности с использованием анализов, основанных на антителах «S» и «M» против уабаина.

Данные о перекрестной реактивности каждого анализа и калибровочные кривые из иммуноанализов, иллюстрирующие перекрестную реактивность каждого антитела с МБГ, уабаином и дигоксином, представлены в таблице 2 и на рисунке 1 соответственно. МБГ и телоцинобуфагин (чистота по данным ВЭЖХ> 98%) были очищены из секрета околоушных желез жаб Bufo marinu s, как сообщалось ранее [13]. Буфалин, цинобуфагин, цинобуфаталин и уабаин были приобретены у Sigma Chemicals (Сент-Луис, Миссури). Проскилларидин А и резибуфагенин были получены от Axxora LLC (Сан-Диего, Калифорния), а маринобуфотоксин был щедрым подарком доктора.Винсент П. Батлер, медицинский факультет Колледжа врачей и хирургов Колумбийского университета, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк.

Таблица 2.

Перекрестная иммунореактивность антител против MBG и против уабаина

9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013

Перекрестные реагенты	Перекрестная иммунореактивность антител (%)
Перекрестные реагенты		mAb против MBG 4G4 90-138	MBG 3E9 mAb	Digibind	Сыворотка против уабаина S	Сыворотка против уабаина M
Маринобуфагенин	100	100	0.2	7	0,05
Маринобуфотоксин	43	4	0,5	1,6	0,06
Telocinobufagin 147		Цинобуфоталин	40	44	4,3	0,3	0,02
Цинобуфагин	0,07	1.4	0,02	0,5	0,02
Резибуфагенин	0,5	0,5	0,8	7	0,15

Проскилларидин А	<0,001	3	1,3	0,2	0,03
Уабаин	0.005	0,02	0,4	100	100
Уабагенин	<0,001	<0,001	0,1	25	Dig 52

0,1	1,5
Дигитоксин	<0,01	0,7	1,2	1,5	0,47
Альдостерон	<0.01	<0,01	<0,01	0,01	0,04
Прогестерон	<0,01	<0,01	<0,01	0,08				0,001	<0,01	0,07	0,001

MB 4G137 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013

Перекрестные реагенты	Перекрестная иммунореактивность антител (%)
Перекрестные реагенты
mAb Anti- mAb	Digibind	Сыворотка против уабаина S	Сыворотка против уабаина M
Маринобуфагенин	100	100	0.2	7	0,05
Маринобуфотоксин	43	4	0,5	1,6	0,06
Telocinobufagin 147		Цинобуфоталин	40	44	4,3	0,3	0,02
Цинобуфагин	0,07	1.4	0,02	0,5	0,02
Резибуфагенин	0,5	0,5	0,8	7	0,15

Проскилларидин А	<0,001	3	1,3	0,2	0,03
Уабаин	0.005	0,02	0,4	100	100
Уабагенин	<0,001	<0,001	0,1	25	Dig 52

0,1	1,5
Дигитоксин	<0,01	0,7	1,2	1,5	0,47
Альдостерон	<0.01	<0,01	<0,01	0,01	0,04
Прогестерон	<0,01	<0,01	<0,01	0,08				0,001	<0,01	0,07	0,001

Таблица 2.

Перекрестная иммунореактивность анти-MBG и антител к уабаину

9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013

Перекрестные реагенты	Перекрестная иммунореактивность 9 антител6 (%) 9 антител
Перекрестные реагенты		mAb против MBG 4G4	mAb против MBG 3E9	Digibind	Сыворотка против уабаина S	Сыворотка против уабаина M
	0.2	7	0,05
Маринобуфотоксин	43	4	0,5	1,6	0,06
Telocinobufagin 147		Цинобуфоталин	40	44	4,3	0,3	0,02
Цинобуфагин	0,07	1.4	0,02	0,5	0,02
Резибуфагенин	0,5	0,5	0,8	7	0,15

Проскилларидин А	<0,001	3	1,3	0,2	0,03
Уабаин	0.005	0,02	0,4	100	100
Уабагенин	<0,001	<0,001	0,1	25	Dig 52

0,1	1,5
Дигитоксин	<0,01	0,7	1,2	1,5	0,47
Альдостерон	<0.01	<0,01	<0,01	0,01	0,04
Прогестерон	<0,01	<0,01	<0,01	0,08				0,001	<0,01	0,07	0,001

MB 4G137 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013

Перекрестные реагенты	Перекрестная иммунореактивность антител (%)
Перекрестные реагенты
mAb Anti- mAb	Digibind	Сыворотка против уабаина S	Сыворотка против уабаина M
Маринобуфагенин	100	100	0.2	7	0,05
Маринобуфотоксин	43	4	0,5	1,6	0,06
Telocinobufagin 147		Цинобуфоталин	40	44	4,3	0,3	0,02
Цинобуфагин	0,07	1.4	0,02	0,5	0,02
Резибуфагенин	0,5	0,5	0,8	7	0,15

Проскилларидин А	<0,001	3	1,3	0,2	0,03
Уабаин	0.005	0,02	0,4	100	100
Уабагенин	<0,001	<0,001	0,1	25	Dig 52

0,1	1,5
Дигитоксин	<0,01	0,7	1,2	1,5	0,47
Альдостерон	<0.01	<0,01	<0,01	0,01	0,04
Прогестерон	<0,01	<0,01	<0,01	0,08				0,001	<0,01	0,07	0,001

Рис. 1.

Смещение связывания mAb против MBG 4G4 ( A ) и 3E9 ( B ), антисыворотки против уабаина S ( C ), антисыворотки против уабаина M ( D ) и Digibind ( E ) к конъюгированным антигенам с помощью кардиотонических стероидов в конкурентных флюороиммуноанализах.

Рис. 1.

Смещение связывания mAb против MBG 4G4 ( A ) и 3E9 ( B ), антисыворотки против уабаина S ( C ), антисыворотки против уабаина M ( D ) ) и Digibind ( E ) к конъюгированным антигенам кардиотоническими стероидами в конкурентных флюороиммуноанализах.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Алликвоты по 50 мкл уремических или контрольных образцов плазмы объединяли. Объединенная нормальная или уремическая плазма (0.5 мл) экстрагировали на картриджах C18 SepPak, как описано выше, сушили в вакуумной центрифуге и фракционировали на жидкостной хроматографической системе Agilent 1100 series. В частности, это включало использование Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 (Agilent Technologies, Пало-Альто, Калифорния), 4,6–150 мм, размер частиц 5 мкм, колонка 80 °, скорость потока 1 мл / мин и линейная (10 –85,5%) градиент ацетонитрила против 0,1% трифторуксусной кислоты (TFA) в течение 45 мин. Тридцать 1,5-минутных фракций были собраны и проанализированы на иммунореактивность МБГ и уабаина.

Статистический анализ

Результаты представлены как средние значения ± SEM. Данные были проанализированы с использованием одностороннего дисперсионного анализа с последующим тестом Ньюмана-Кеулса и двусторонним тестом t (если применимо) (программное обеспечение GraphPad Prism, Сан-Диего, Калифорния). Двустороннее значение P <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Пациенты с ХБП существенно не отличались от контрольной группы по возрасту, полу и массе тела (таблица 1).Как показано на рисунке 2, у пациентов с ХБП уровень МБГ в плазме в 3,5 раза выше, чем в контрольной группе. Когда концентрации ЭО определялись с помощью анализа, основанного на антителе М против уабаина, уровни этого гормона у пациентов с ХЗП не отличались от контрольных значений, но анализ, основанный на антителе S, которое проявляет перекрестную иммунореактивность с буфадиенолидами, обнаружил почти 2 -кратное повышение ЭО у пациентов с хронической почечной недостаточностью. Анализ, основанный на Digibind, не обнаружил иммунореактивности в отдельных образцах плазмы как от CKD, так и от контрольной группы (данные не показаны).Когда образцы из каждой группы были объединены и сконцентрированы в 10 раз, уровни CTS, измеренные с помощью флуоресцентного иммуноанализа Digibind у пациентов с ХЗП, были увеличены в 4 раза по сравнению с контрольной группой, что было пропорционально наблюдаемому увеличению уровней МБГ в плазме, наблюдаемому у пациентов. этих пациентов (рис. 2D). Чтобы подтвердить, что антитело против уабаина S действительно проявляет большую перекрестную реактивность с МБГ по сравнению с антителом против уабаина M, мы объединили аликвоты контрольной плазмы, добавили в нее МБГ (рис. 2E), экстрагировали их на картриджах C18 SepPak и определили уровни МБГ и уабаин-подобной иммунореактивности с использованием обоих антител против уабаина.Как показано на Фигуре 2F, антитело против уабаина S обнаруживает повышение уровней МБГ намного лучше, чем антитело против уабаина M.

Рис. 2.

Уровни MBG в плазме, измеренные с использованием 4G4 mAb против MBG ( A ), и EO, измеренные с использованием антисывороток против уабаина M ( B ) и S ( C ) у здоровых контролей (Ctrl ) и у пациентов с ХБП. ( D ) Определение уровней CTS в объединенных образцах плазмы от Ctrl и CKD с использованием конкурентного флюороиммуноанализа на основе Digibind.Средние ± SEM. Двусторонний т -тест. Определение иммунореактивности MBG (4G4 mAb) ( E ) и иммунореактивности уабаина, определяемой с использованием антисывороток M и S против уабаина ( F ) в объединенных образцах плазмы от здоровых контролей с добавлением MBG (0,125, 0,25, 0,5, 1,0 и 2 нмоль / л).

Рис. 2.

Уровни MBG в плазме, измеренные с использованием 4G4 анти-MBG mAb ( A ), и EO, измеренные с использованием антисывороток против уабаина M ( B ) и S ( C ) у здоровых контролей ( Ctrl) и у пациентов с ХБП.( D ) Определение уровней CTS в объединенных образцах плазмы от Ctrl и CKD с использованием конкурентного флюороиммуноанализа на основе Digibind. Средние ± SEM. Двусторонний т -тест. Определение иммунореактивности MBG (4G4 mAb) ( E ) и иммунореактивности уабаина, определяемой с использованием антисывороток M и S против уабаина ( F ) в объединенных образцах плазмы от здоровых контролей с добавлением MBG (0,125, 0,25, 0,5, 1,0 и 2 нмоль / л).

На рис. 3A и C показано элюирование эндогенного MBG-иммунореактивного материала из контрольной плазмы из колонки для ВЭЖХ Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18.Стандарт МБГ элюируется во фракции 16, как указано на графиках стрелкой. Эндогенный MBG-иммунореактивный материал из нормальных клеток, определенный с использованием как 4G4, так и 3E9 анти-MBG mAb, элюировался во фракциях 9–29 с характерным пиком иммунореактивности, элюируемым во фракции 16, который совпадал со временем элюирования стандарта MBG. После фракционирования с помощью ВЭЖХ уровней MBG в уремической плазме иммунореактивность, элюируемая во фракции 16, показала существенное увеличение по сравнению с контрольной плазмой (фиг. 3B и D).Величина этого увеличения была пропорциональна величине повышения уровня МБГ в плазме у пациентов с ХЗП.

Рис. 3.

Характер элюции эндогенного МБГ и иммунореактивности уабаина после фракционирования экстрактов нормальной плазмы человека ( A , C , E и G ) и уремической плазмы человека ( B ). , D , F и H ) на колонке для ВЭЖХ с обращенной фазой в линейном градиенте ацетонитрила (пунктирная линия).Время удерживания стандартов МБГ и уабаина (OU) указано стрелками.

Рис. 3.

Характер элюции эндогенного МБГ и иммунореактивности уабаина после фракционирования экстрактов нормальной плазмы человека ( A , C , E и G ) и уремической плазмы человека ( B , D , F и H ) на колонке для ВЭЖХ с обращенной фазой в линейном градиенте ацетонитрила (пунктирная линия). Время удерживания стандартов МБГ и уабаина (OU) указано стрелками.

Как показано на фиг. 3E и G, максимум эндогенного иммунореактивного материала оуабаин, обнаруживаемый как S-, так и M-антителами против уабаина, элюируется из колонки для ВЭЖХ во фракции 6, что соответствует стандарту элюирования уабаина. После фракционирования уремической плазмы с помощью ВЭЖХ оба антитела против уабаина не выявили увеличения уровней ЭО во фракции ВЭЖХ, элюируемой во фракции 6. Антитело М против уабаина обнаружило умеренное увеличение иммунореактивности уабаина, элюируемое во фракциях 9–16. , в то время как антитело S обнаружило значительное увеличение иммунореактивности уабаина, элюируемой во фракциях 11-17 (рис. 3F и H), что перекрывается со временем элюирования MBG и других буфадиенолидных CTS (телоцинобуфагин, фракция 14; MBG, фракция 16; цинобуфаталин, фракция 16 и буфалин, фракция 17).

Как показано на Рисунке 4A, у пациентов с ХБП активность Na / K-АТФазы в эритроцитах была подавлена на 56% по сравнению с контрольной группой и отрицательно коррелировала с плазменными концентрациями МБГ (Рисунок 4B), но не EO ( r = 0,34, P = 0,30 для EO, измеренного с антителом M, и r = 0,45, P = 0,16 для EO, измеренного с антителом S). Обработка ex vivo эритроцитов пациентов с ХЗП с помощью mAb 3E9 против MBG и дигибинд приводила к частичному, но значительному восстановлению активности Na / K-АТФазы (фиг. 4A).Примечательно, что обработка ex vivo антителом 3E9 существенно не изменяла активность Na / K-АТФазы в эритроцитах контрольных субъектов.

Рис. 4.

( A ) Na / K-АТФаза эритроцитов у здоровых контрольных субъектов и у пациентов с ХБП в отсутствие и в присутствии Digibind и 3E9 mAb против MBG. Средние ± SEM. Односторонний дисперсионный анализ с последующим тестом Ньюмана – Кеулса. ( B ) Корреляция между уровнями МБГ в плазме и активностью Na / K-АТФазы в эритроцитах у пациентов с ХБП.Двусторонний т -тест.

Рис. 4.

Чтобы определить, соответствуют ли изменения CTS у крыс PNx изменениям, наблюдаемым у пациентов с ХБП, мы затем определили уровни иммунореактивности МБГ, ЭО и дигоксина у интактных крыс Sprague-Dawley у животных с почечной недостаточностью.У крыс Sprague-Dawley PNx приводил к заметному увеличению креатинина в плазме, развитию гипертонии и окислительного стресса, что оценивалось по уровням карбонилированного белка в плазме и сердце (таблица 3). Как показано на фиг. 5, паттерны изменений уровней CTS в плазме у крыс PNx были идентичны тем, которые наблюдались у пациентов с ХЗП. У крыс Sprague-Dawley PNx сопровождался значительным повышением уровня MBG, измеренного с помощью 4G4 mAb, и EO, определенного с использованием антисыворотки S, но не антисыворотки M. Анализ дигоксина DELFIA на основе Digibind обнаружил повышенные уровни CTS в объединенных 10-кратно концентрированных образцах плазмы из PNx по сравнению с контрольными крысами.Как и у пациентов с ХБП, у крыс PNx величина повышения CTS в плазме, определенная с помощью Digibind, была пропорциональна значению, определенному с помощью анализа, основанного на mAb против MBG 4G4.

Таблица 3.

Физиологические измерения после PNxa

, мг / d 0,07 Карбонилированный белок левого желудочка, пмоль / мг белка

Переменная	Sham ( n = 8)	PNx ( n = 6)
Креатинин в плазме	0.64 ± 0,03 *
Систолическое артериальное давление	110 ± 5	189 ± 14 *
HW / BW, × 10 ²	0,26 ± 0,03	0,36 ± 0,0143 *
319 ± 7	514 ± 20 *
Карбонилированный белок в плазме, пмоль / мг белка	171 ± 9	320 ± 20 *

Переменная	Sham ( n = 8)	PNx ( n = 6)
Креатинин плазмы, мг / дл	0.35 ± 0,07	0,64 ± 0,03 *
Систолическое артериальное давление	110 ± 5	189 ± 14 *
HW / BW, × 10 ²	0,26 ± 0,03	*
Карбонилированный белок левого желудочка, пмоль / мг белка	319 ± 7	514 ± 20 *
Карбонилированный белок плазмы, пмоль / мг белка	171 ± 9	32014 ± 20 *

Таблица 3.

Физиологические измерения после PNxa

138 9015 9015, мг / дл 0,64 ± 0,03 * Карбонилированный белок левого желудочка, пмоль / мг белка

Переменная	Имитация ( n = 8)	PNx ( n = 6)
Креатинин в плазме
Систолическое артериальное давление	110 ± 5	189 ± 14 *
HW / BW, × 10 ²	0,26 ± 0,03	0,36 ± 0,0147	319 ± 7	514 ± 20 *
Карбонилированный белок в плазме, пмоль / мг белка	171 ± 9	320 ± 20 *

Переменная	Sham ( n = 8)	PNx ( n = 6)
Креатинин плазмы, мг / дл	0.35 ± 0,07	0,64 ± 0,03 *
Систолическое артериальное давление	110 ± 5	189 ± 14 *
HW / BW, × 10 ²	0,26 ± 0,03	*
Карбонилированный белок левого желудочка, пмоль / мг белка	319 ± 7	514 ± 20 *
Карбонилированный белок плазмы, пмоль / мг белка	171 ± 9	32014 ± 20 *

Рис.5.

CTS у крыс с почечной недостаточностью. Уровни MBG в плазме измеряли с использованием 4G4 анти-MBG mAb ( A ) и EO измеряли с использованием антисывороток M ( B ) и S ( C ) у искусственно оперированных (Sham) и PNx крыс. ( D ) Определение уровней CTS в объединенных образцах плазмы от Sham и PNx с использованием конкурентного флюороиммуноанализа на основе Digibind. Средние ± SEM. Двусторонний т -тест.

Рис. 5.

CTS у крыс с почечной недостаточностью. Уровни MBG в плазме измеряли с использованием 4G4 анти-MBG mAb ( A ) и EO измеряли с использованием антисывороток M ( B ) и S ( C ) у искусственно оперированных (Sham) и PNx крыс.( D ) Определение уровней CTS в объединенных образцах плазмы от Sham и PNx с использованием конкурентного флюороиммуноанализа на основе Digibind. Средние ± SEM. Двусторонний т -тест.

Обсуждение

Основные результаты настоящего исследования заключаются в том, что уровни CTS у пациентов и экспериментальных крыс с хронической почечной недостаточностью демонстрируют сходный характер изменений, и что MBG, а не EO, становится повышенным и способствует ингибированию Na / K-АТФазы при ХЗП.Поскольку при хронической почечной недостаточности CTS представляют собой потенциально важные терапевтические мишени, важность определения природы CTS, участвующей в патогенезе ХБП, очевидна. Повышение CTS у уремических субъектов [17] и у крыс PNx [18, 19] было обнаружено давно, и обнаружение ложноположительной иммунореактивности наперстянки в уремической сыворотке было одним из первых открытий, указывающих на важность эндогенных дигиталисоподобных CTS в объемная гипертензия и почечная недостаточность [17]. Данные о природе CTS, вовлеченной в хроническую почечную недостаточность, противоречивы.Нарусэ и др. [7] сообщил о повышенных уровнях иммунореактивности уабаина в плазме у уремических субъектов. Недавно Stella et al. [9] продемонстрировали, что уровни ЭО в плазме пациентов с ХБП значительно превышали уровни, наблюдаемые у субъектов с нормальным АД в других исследованиях. Schoner et al. [20], однако, продемонстрировал, что уабаин-подобный CTS, который становится повышенным в уремической плазме, является более гидрофобным, чем уабаин, что согласуется с профилем элюирования МБГ из колонок для обращенно-фазовой ВЭЖХ в нашем настоящем (рис. 3) и ранее [ 14, 16] этюд.Соответственно, Tao et al. [21] продемонстрировали, что CTS, очищенная из перитонеального диализата пациентов с хронической почечной недостаточностью, проявляет повышенное сродство к α-1, а не к α2 / α-3 изоформам Na / K-АТФазы, что аналогично профилю ингибирования Na / Изоформы К-АТФазы по МБГ [22, 23]. Впоследствии, используя тесты, основанные на поликлональных антителах, мы продемонстрировали, что уровни МБГ, а не ЭО повышаются в плазме пациентов с ХБП [8].

В настоящем исследовании с использованием конкурентного иммуноанализа, основанного на моноклональных антителах, которые являются высокоспецифичными к буфадиенолиду CTS, мы демонстрируем, что уровни МБГ заметно увеличиваются как у пациентов с ХБП, так и у крыс после субтотальной нефрэктомии.В настоящем исследовании оба анти-MBG mAb, использованные для измерения CTS и для иммунонейтрализации ex vivo CTS, показали чрезвычайно низкую перекрестную реактивность с уабаином, и характер индуцированных уремией изменений уровней CTS был идентичным у обоих пациентов. с ХБП и крысами, подвергшимися PNx. В нашем исследовании для определения ЭО мы использовали два антитела против уабаина: антисыворотку S, которая проявляет значительную перекрестную иммунореактивность с буфадиенолидом CTS, включая MBG, и антисыворотку M, которая не реагирует перекрестно с буфадиенолидами (Таблица 1 ).Мы обнаружили, что как у уремических пациентов, так и у крыс PNx, повышение ЭО выявлялось антителом S, но не антителом M. Примечательно, что после фракционирования уремической плазмы с помощью ВЭЖХ антитело M против уабаина перекрестно реагировало с материалом, совместно элюирующимся с аутентичным уабаином, в то время как Антитело S против уабаина в дополнение к менее полярному материалу, коэлюлированному с уабаином, также взаимодействовало с более полярными фракциями ВЭЖХ, которые перекрывались с фракциями, содержащими высокие уровни иммунореактивности MBG. Эти наблюдения не согласуются с предыдущими данными о повышенных уровнях ЭО у пациентов с ХБП [7, 9] и предполагают, что именно МБГ, а не ЭО, увеличивается при почечной недостаточности.Следовательно, мы считаем, что именно МБГ представляет собой более логичную терапевтическую цель в этом состоянии, особенно учитывая, что у крыс PNx активная иммунизация против МБГ снижает уровень сердечного оксидативного стресса и фиброза [5], отличительных признаков уремической кардиомиопатии [24, 25]. . Следует отметить, что в предыдущих исследованиях, демонстрирующих повышенные уровни ЭО у пациентов с ХБП и у крыс PNx, данных о перекрестной реактивности антител против уабаина и буфадиенолида CTS не сообщалось [7, 9, 20]. Учитывая значительную вариабельность уровней ЭО в плазме, о которых сообщают различные группы [26], стандартизация «собственных» анализов CTS и разработка надежных коммерческих иммуноанализов, предпочтительно основанных на моноклональных антителах, будет иметь важное значение для последующих клинических исследований эндогенных лигандов натриевой помпы. .

Ранее мы продемонстрировали, что у пациентов с повышенным уровнем преэклампсии в плазме уровни МБГ были связаны с ингибированием Na / K-АТФазы в эритроцитах, которое было обратимым как мАт 3E9, так и Digibind [14], а также ингибированием преэклампсии в плаценте, буфадиенолидом CTS, включая MBG, а не EO, представляет собой цель для Digibind [27]. В настоящем исследовании как мАт 3E9, так и Digibind ex vivo восстанавливали активность Na / K-АТФазы в эритроцитах пациентов с ХБП. Кроме того, в настоящем исследовании уровни MBG в плазме показали отрицательную корреляцию с Na / K-ATPase, что указывает на причинную связь между повышенными уровнями MBG и ингибированием Na / K-ATPase у пациентов с CKD.Эти наблюдения согласуются с результатами нескольких предыдущих исследований, в которых было показано, что активность Na / K-АТФазы эритроцитов отражает плазменные уровни эндогенных [13, 14, 28, 29] и экзогенных [30–32] CTS, и в которых ex vivo инкубация плазмы в присутствии CTS-нейтрализующих антител обращала CTS-индуцированное ингибирование Na / K-АТФазы в эритроцитах у новорожденных [28], у людей во время произвольной гиповентиляции [13] и из-за нагруженного NaCl Dahl-S крысы [33]. Наши настоящие и предыдущие наблюдения, что Digibind выявляет повышенные уровни CTS в плазме у пациентов с ХЗП, отменяет индуцированное CTS ингибирование Na / K-АТФазы и снижает артериальное давление при экспериментальной гипертензии, индуцированной NaCl [14], предполагают, что Digibind может использоваться в клинических условиях для иммунонейтрализация повышенных уровней CTS у этих пациентов.

Эти исследования были поддержаны Программой внутренних исследований, Национальным институтом старения, Национальными институтами здравоохранения (NIH) (O.V.F., G.P. и A.Y.B.) и грантом NIH HL071556 (J.I.S.). Авторы благодарны Антону Бжелянскому, MA (Исследовательский институт MedStar, Хяттсвилл, Мэриленд) за советы и анализы методом ВЭЖХ.

Заявление о конфликте интересов. Не заявлено.

Список литературы

1 ..

Уремическая кардиомиопатия – эндогенная интоксикация дигиталисом?

J Am Soc Nephrol

2006

, т.

(стр.

1493

–

1497

) 2.,.

Эндогенный дигиталис: патофизиологическая роль и терапевтическое применение

Nat Clin Pract Nephrol

2008

, vol.

(стр.

378

–

392

) 3.,,.

Эндогенные кардиотонические стероиды: физиология, фармакология и новые терапевтические мишени

Pharmacol Rev

2009

, vol.

(стр.

–

) 4., , , и другие.

Центральная роль кардиотонического стероида маринобуфагенина в патогенезе экспериментальной уремической кардиомиопатии

Гипертония

2006

, vol.

(стр.

488

–

495

) 5.,,, Et al.

Маринобуфагенин стимулирует выработку коллагена фибробластами и вызывает фиброз при экспериментальной уремической кардиомиопатии

Гипертония

2007

, vol.

(стр.

215

–

224

) 6., , , и другие.

Маринобуфагенин индуцирует увеличение экспрессии проколлагена в процессе с участием протеинкиназы C и Fli-1: последствия для уремической кардиомиопатии

Am J Physiol Renal Physiol

2009

, vol.

296

(стр.

F1219

–

F1226

) 7.,,, Et al.

Происходит ли иммунореактивный уабаин в плазме крови из надпочечников?

Гипертония

1994

, т.

1 Дополнение

(стр.

I102

–

I105

) 8.,,, И др.

Одновременное измерение маринобуфагенина, уабаина и белка, связанного с гипертензией, при различных болезненных состояниях

Clin Exp Hypertens

1998

, vol.

(стр.

617

–

627

) 9.,,, Et al.

Эндогенный уабаин и кардиомиопатия у диализных пациентов

J Intern Med

2008

, vol.

263

(стр.

274

–

280

) 10..

Антидигоксиновые антитела при эклампсии

N Engl J Med

1988

, vol.

318

(стр.

518

–

559

) 11.,,, Et al.

Повышенный уровень эндоксин-подобного фактора, осложняющий многоплодную беременность во втором триместре: лечение дигоксин-связывающим иммуноглобулином

Am J Nephrol

1996

, vol.

(стр.

529

–

531

) 12.,,, Et al.

Гемодинамические эффекты внутривенного дигоксин-связывающего fab иммуноглобулина при тяжелой преэклампсии: двойное слепое рандомизированное клиническое исследование

J Perinatol

2009

, vol.

(стр.

284

–

289

) 13.,,, Et al.

Эндогенный маринобуфагенин-подобный иммунореактивный фактор и ингибирование Na +, K + АТФазы при произвольной гиповентиляции

Гипертония

1995

, vol.

(стр.

781

–

788

) 14.,,, Et al.

Моноклональное антитело к эндогенному буфадиенолиду, маринобуфагенин, обращает вспять ингибирование Na / K-АТФазы, вызванное преэклампсией, и снижает кровяное давление при гипертонической болезни, чувствительной к NaCl

J Hypertens

2008

, vol.

(стр.

2414

–

2425

) 15.,,, Et al.

Карбонильные анализы для определения окислительно модифицированных белков

Meth Enzymol

1994

, vol.

233

(стр.

346

–

357

) 16.,,, Et al.

Циркулирующие буфодиенолидные и карденолидные ингибиторы натриевой помпы при преэклампсии

J Hypertens

1999

, vol.

(стр.

1179

–

1187

) 17.,,.

Эндогенное дигоксиноподобное вещество у пациентов с почечной недостаточностью

Ann Intern Med

1983

, vol.

(стр.

604

–

608

) 18.,,, Et al.

Роль потребления натрия, Na + -K + помпы и уабаин-подобного гуморального агента в генезе гипертонии со сниженной массой почек

Am J Nephrol

1983

, vol.

(стр.

–

) 19.,,, Et al.

Потенциалы гладкомышечных мембран сосудов у крыс с одной почкой, одним зажимом и пониженной почечной масс-солевой гипертензией: влияние гуморального ингибитора натриевого насоса

J Hypertens Suppl

1985

, vol.

(стр.

S29

–

S31

) 20.,,, Et al.

Очистка и свойства эндогенных уабаиноподобных веществ из гемофильтрата и надпочечников

J Cardiovasc Pharmacol

1993

, vol.

Дополнение 2

(стр.

S29

–

S31

) 21.,,, Et al.

Специфичность объемно-чувствительного ингибитора натриевого насоса, выделенного из перитонеального диализата человека, при хронической почечной недостаточности

Kidney Int

1996

, vol.

(стр.

420

–

429

) 22.,.

Ингибирование Na / K-АТФазы из аорты крысы двумя эндогенными ингибиторами Na / K помпы, уабаином и маринобуфагенином. Доказательства взаимодействия с различными изоформами альфа-субъединиц

Am J Hypertens

1997

, vol.

(стр.

929

–

935

) 23.,,, Et al.

Маринобуфагенин, эндогенный лиганд натриевого насоса α-1, у гипертензивных солеочувствительных крыс Даля

Гипертензия

2001

, vol.

(стр.

462

–

466

) 24 ..

Сердечно-сосудистые заболевания при хронической почечной недостаточности: патофизиологические аспекты

Semin Dial

2003

, vol.

(стр.

–

) 25.,,, Et al.

Слон в уремии: оксидантный стресс как объединяющее понятие сердечно-сосудистых заболеваний в уремии

Kidney Int

2002

, vol.

(стр.

1524

–

1538

) 26., , , и другие.

Уабаин, циркулирующий гормон, секретируемый надпочечниками, имеет решающее значение при сердечно-сосудистых заболеваниях. Факт или фантазия?

J Hypertens

2009

, т.

(стр.

–

) 27.,,, Et al.

Взаимодействие Digibind с эндогенными кардиотоническими стероидами из преэкламптических плацент

J Hypertens

2010

, vol.

(стр.

361

–

366

) 28.,,, Et al.

Ингибирование насоса Na +, K + в эритроцитах после инфузии физиологического раствора у существенно гипертензивных субъектов: эффекты введения канренона

Int J Cardiol

1989

, vol.

Дополнение 1

(стр.

S47

–

S52

) 29.,,, Et al.

Стимулирующий эффект на поглощение рубидия-86 эритроцитами человека анти-сердечными гликозидными антителами

Q J Nucl Med

1995

, vol.

(стр.

134

–

139

) 30.,,, Et al.

Выделение дигоксин-специфического антитела и его использование для устранения эффектов дигоксина

Proc Natl Acad Sci USA

1971

, vol.

(стр.

2401

–

2406

) 31.,.

Na +, K + -АТФаза красных клеток: метод оценки степени ингибирования образца фермента, содержащего неизвестное количество связанного сердечного гликозида

Life Sci

1975

, vol.

(стр.

1253

–

1261

) 32.,,, Et al.

Ранние и поздние эффекты лечения дигоксином на транспорт натрия, содержание натрия и Na + K + – АТФазу или эритроциты

Br J Clin Pharmacol

1981

, vol.

(стр.

565

–

570

) 33.,,, Et al.

Эндогенный лиганд альфа (1) натриевого насоса, маринобуфагенин, является новым медиатором гипертонии, зависимой от хлорида натрия.

Circulation

2002

, vol.

105

(стр.

1122

–

1127

)

Кравчук Елена Сергеевна

E-mail: [email protected]; [email protected]

Образование

2001 г.Доктор биологических наук, Красноярский государственный университет, Красноярск, Россия
2004 кандидат наук, гидробиология, Институт биологии внутренних вод РАН, Борок, Россия
к.т.н. кандидатская диссертация Эколого-физиологические аспекты цветения сине-зеленых водорослей на двух водоемах (окрестности г. Красноярска).

Опыт работы

1999 – настоящее время Лаборатория экспериментальной гидроэкологии Института биофизики СО РАН, старший научный сотрудник, научные сотрудники (2004-2006 гг.), Младший научный сотрудник (2000-2004 гг.)

Исследовательский интерес

Экология, биохимия и физиология пресноводных водорослей

Приняли участие в международных конференциях:

2006 5-я Международная конференция по лимнологии коллектора и качеству воды, Брно, Чешская Республика
2010 31-й Конгресс SIL (Международное общество лимнологов), Кейптаун, Южная Африка
2015 9-й симпозиум европейских пресноводных наук, Женева, Швейцария

Избранные статьи в рецензируемых журналах

Гладышев М.И., Колмаков В.И., Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Трусова М.Ю., Грибовская И.В., Жиленков М.Д. (2000) Рост и выживаемость цианобактерий в воде цветущих и нецветущих водоемов в условиях эксперимента. Доклады биологических наук, 375: 607-609.
Гладышев М.И., Колмаков В.И., Кравчук Е.С., Калачева Г.С., Колмакова А.А., Грибовская И.В., Москвичева А.В., Трусова М.Ю., Жиленков М.Д., Махутова О.Н. (2001) Прорастание акинет цианобактерий из донных отложений в воде цветущих и нецветущих прудов в условиях эксперимента.Доклады биологических наук, 378: 236-239.
Колмаков В.И., Гаевский Н.А., Иванова Е.А., Дубовская О.П., Грибовская И.В., Кравчук Е.С. (2002) Сравнительный анализ экофизиологических характеристик Stephanodiscus hantzschii Grun. в периоды цветения в рекреационных водоемах. Российский экологический журнал, 33 (2): 97-103
Гладышев М.И., Кравчук Е.С., Колмаков В.И., Иванова Е.А., Трусова М.Ю., Сущик Н.Н., Грибовская И.В. (2002) Экспериментальное изучение послевоенного прорастания акинет и покоящихся клеток цианопрокариот из донных отложений цветущих и нецветущих водоемов. Доклады биологических наук, 383: 131-132.
Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Гладышев М.И. (2002) Сезонная динамика численности Anabaena flos-aquae (Lyngb.) Breb. akinetes в поверхностном слое донных отложений и объемной воды. Доклады биологических наук, 384: 233-234.
Колмаков В.И., Гладышев М.И., Кравчук Е.С., Грибовская И.В. Возможные механизмы стимуляции роста цианобактерий при прохождении через кишечник Carassius auratus: экспериментальное исследование. Доклады биологических наук, 384: 230-232.
Сущик Н.Н., Гладышев М.И., Калачова Г.С., Кравчук Е.С., Дубовская О.П., Иванова Е.А. (2003) Твердые жирные кислоты в двух небольших сибирских водохранилищах, в которых преобладают различные группы фитопланктона. Пресноводная биология, 48: 394-403
Гладышев М.И., Чупров С.М., Колмаков В.И., Дубовская О.П., Задорин А.А., Зуев И.В., Иванова Е.А., Кравчук Е.С. (2003) Биоманипуляция в обход трофического каскада в небольшом резервуаре. Доклады биологических наук, 390: 235-236.
Калачева Г.С., Колмакова А.А., Гладышев М.И., Кравчук Е.С., Иванова Е.А. (2004) Сезонная динамика аминокислот в двух небольших сибирских водоемах с преобладанием прокариотического и эукариотического фитопланктона. Водная экология, 38: 3-15
Сущик Н.Н., Гладышев М.И., Махутова О.Н., Калачова Г.С., Кравчук Е.С., Иванова Е.А. (2004) Связь твердых частиц незаменимых жирных кислот семейства w3 с видовым составом фитопланктона в сибирском водохранилище. Пресноводная биология, 49: 1206-1219.
Гладышев М.И., Сущик Н.Н., Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Агеев А.В., Калачева Г.С. (2005) Сезонные изменения запасов незаменимых полиненасыщенных жирных кислот в биомассе фито- и зообентоса на прибрежной станции Енисея. Река.Доклады биологических наук, 403: 267-268.
Колмаков В.И., Гладышев М.И. Кравчук Е.С., Чупров С.М., Анищенко О.В., Иванова Е.А., Трусова М.Ю. (2006) Видоспецифическая стимуляция цианобактерий толстолобиком Hypophthalmichthys molitrix (Val.). Доклады биологических наук, 408: 223-225.
Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Гладышев М.И. (2006) Сезонная динамика акинет Anabaena flos-aquae в донных отложениях и водной толще небольшого сибирского водохранилища.Водная экология, 40: 325-336
Гладышев М.И., Сущик Н.Н., Колмакова А.А., Калачова Г.С., Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Махутова О.Н. (2007) Сезонные корреляции элементного и w3 ПНЖК сестона и доминирующих видов фитопланктона в эвтрофном сибирском водохранилище. Водная экология, 41: 9-23
Кравчук Е.С., Гладышев М.И., Иванова Е.А. (2007) Зависимость доминирования Anabaena flos-aquae (Lyngb.) Breb. в сообществе фитопланктона от исходной численности акинет.Доклады биологических наук, 416: 377-378.
Сущик Н.Н., Гладышев М.И., Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Агеев А.В., Калачова Г.С. (2007) Сезонная динамика длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот в прибрежном бентосе в верховьях Енисея. Водная экология, 41: 349-365.
Хельвегер Ф.Л., Кравчук Е.С., Новотный В., Гладышев М.И. (2008) Агентное моделирование сложного жизненного цикла цианобактерии (Anabaena) в неглубоком водоеме.Лимнология и океанография, 53 (4): 1227-1241
Сущик Н.Н., Гладышев М.И., Махутова О.Н., Кравчук Е.С., Дубовская О.П., Калачева Г.С. (2008) Сезонный перенос пула эссенциальной эйкозапентаеновой кислоты по пелагической трофической цепи эвтрофного резервуара. Доклады биологических наук, 422: 355-356.
Гладышев М.И., Сущик Н.Н., Махутова О.Н., Калачева Г.С., Колмакова А.А., Кравчук Е.С., Дубовская О.П. (2009) Эффективность переноса незаменимых полиненасыщенных жирных кислот по трофическим цепям в водных экосистемах.Доклады биологических наук, 426: 158-160.
Анищенко О.В., Гладышев М.И., Кравчук Е.С., Сущик Н.Н., Грибовская И.В. (2009) Распределение и миграция металлов в трофических цепях экосистемы Енисея в районе города Красноярска. Водные ресурсы, 36 (5): 594-603
Кравчук Е.С. (2009) Сезонная динамика акинет Anabaena flos-aquae в донных отложениях и водной толще небольшого сибирского водохранилища. Современные проблемы экологии, 2 (5): 467-471
Кравчук Е.С., Иванова Е.А. (2009) Пространственно-временная динамика Anabaena flos-aquae akinetes в донных отложениях небольшого сибирского водохранилища. Журнал Сибирского федерального университета, Биология, 2 (2): 237-247.
Сущик Н.Н., Гладышев М.И., Иванова Е.А., Кравчук Е.С. (2010) Сезонное распределение и жирнокислотный состав прибрежных микроводорослей реки Енисей. Журнал прикладной психологии, 22: 1124
Анищенко О.В., Гладышев М.И., Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Грибовская И.В., Сущик Н.Н. (2010) Сезонные колебания концентраций металлов в перифитоне и таксономический состав водорослевого сообщества прибрежного участка реки Енисей. Центральноевропейский биологический журнал, 5: 125134
Гладышев М.И., Сущик Н.Н., Махутова О.Н., Дубовская О.П., Кравчук Е.С., Калачова Г.С., Хромечек Е.Б. (2010) Корреляция между жирнокислотным составом сестона и зоопланктона и влиянием экологических параметров в эвтрофном сибирском водохранилище.Лимнологика, 40 (4): 343-357
Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Гладышев М.И. (2011) Пространственное распределение стадий покоя (акинет) цианобактерий Anabaena flos-aquae в отложениях и его влияние на пелагические популяции. Морские и пресноводные исследования, 62: 450461
Кучкина А.Ю., Гладышев М.И., Сущик Н.Н., Кравчук Е.С., Калачова Г.С. (2011) Производство биодизеля из отложений эвтрофного водоема. Биомасса и биоэнергетика, 35 (5), 2280-2284
Кравчук Е.С., Анисимова Т. В. (2012) Возможное влияние слоев макрофитов на количество акинет сине-зеленых водорослей на литорали водоема. Современные проблемы экологии, 5 (4): 430-433
Колмакова А.А., Гладышев М.И., Калачева Г.С., Кравчук Е.С., Иванова Е.А., Сущик Н.Н. (2013) Аминокислотный состав эпилитической биопленки и придонных животных в большой сибирской реке. Пресноводная биология, 58 (10): 2180-2195.
Толомеев А.П., Анищенко О.В., Кравчук Е.С., Колмакова О.В., Глущенко Л.А., Махутова О.Н., Колмакова А.А., Колмаков В.И., Трусова М.Ю., Сущик Н.Н., Гладышев М.И. (2014) Составные элементы углеродного цикла в экосистеме среднего и нижнего Енисея. Современные проблемы экологии, 7 (4): 489-500.
Кравчук Е.С., Сущик Н.Н., Махутова О.Н., Трусова М.Ю., Калачева Г.С., Гладышев М.И. (2014) Различия в сигнатурах изотопов углерода полиненасыщенных жирных кислот двух видов микроводорослей.Доклады биологических наук, 459: 183-185.
Гладышев М.И., Колмакова О.В., Толомеев А.П., Анищенко О.В., Махутова О.Н., Колмакова А.А., Кравчук Е.С., Глущенко Л.А., Колмаков В.И., Сущик Н.Н. (2015) Различия в органическом веществе и бактериопланктоне между участками крупнейшей арктической реки: мозаика или континуум? Лимнология и океанография, 60 (4): 1314-1331
Гладышев М.И., Махутова О.Н., Кравчук Е.С., Анищенко О.В., Сущик Н. (2016) Стабильное изотопное фракционирование жирных кислот дафний, питаемых лабораторными культурами микроводорослей. Лимнологика, 56: 23-29

Членство в научных обществах:

Кравчук Елена Сергеевна

Лаборатория экспериментальной гидроэкологии

Институт биофизики СО РАН

Академгородок, 660036, Красноярск, Россия

Тел .: +7391 2

Эндогенные кардиотонические стероиды при хронической почечной недостаточности

Трансплантат Nephrol Dial. 2011 сен; 26 (9): 2912–2919.

, ¹, ², ², ¹, ², ³, ^4, ^5, ⁶, ³, ², ^{4 ^{4 ⁴ ² и ⁴ Елена В.Колмакова
¹ Отделение хронического диализа, Медицинская академия им. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
Стивен Т. Халлер
² Медицинский колледж Университета Толедо, Толедо, Огайо, США
Дэвид Дж. Кеннеди
² Медицинский колледж Университета Толедо, Толедо, Огайо, США
Алина Н. Исачкина
¹ Отделение хронического диализа Медицинской академии им. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
Георгий В.Будный
² Медицинский колледж Университета Толедо, Толедо, Огайо, США
Елена В. Фролова
³ Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова, Санкт-Петербург, Россия
Grzegorz Piecha
29 4 Лаборатория сердечно-сосудистых исследований, Национальный институт старения, Национальные институты здравоохранения, Балтимор, Мэриленд, США
⁵ Отделение внутренней медицины, Отделение нефрологии, Гейдельбергский университет, Гейдельберг, Германия
⁶ Отделение Нефрология, эндокринология и метаболические заболевания, Силезский медицинский университет, Катовице, Польша
Елена Р.Никитина
³ Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова, Санкт-Петербург, Россия
Дипак Мальхотра
² Медицинский колледж Университета Толедо, Толедо, Огайо, США
Ольга В. Федорова
91 4 Лаборатория сердечно-сосудистых исследований, Национальный институт старения, Национальные институты здравоохранения, Балтимор, Мэриленд, США
Джозеф И. Шапиро
² Медицинский колледж Университета Толедо, Толедо, Огайо, США
Алексей Ю. .Багров
⁴ Лаборатория сердечно-сосудистых исследований, Национальный институт старения Национального института здоровья, Балтимор, Мэриленд, США
¹ Отделение хронического диализа Медицинской академии им. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
² Колледж наук, Университет Толедо, Толедо, Огайо, США
³ Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова, Санкт-Петербург, Россия
⁴ Лаборатория сердечно-сосудистых исследований, Национальный институт старения, Национальные институты здравоохранения, Балтимор, Мэриленд, США
⁵ Отделение внутренней медицины, Отделение нефрологии, Гейдельбергский университет, Гейдельберг, Германия
⁶ Отделение нефрологии, эндокринологии и метаболических заболеваний, Силезский медицинский университет, Катовице, Польша
Автор, ответственный за переписку. Поступило 15 мая 2010 г .; Принято 29 ноября 2010 г.
Авторские права Опубликовано Oxford University Press от имени ERA-EDTA 2011. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected] Эта статья цитируется в других статьях PMC. Абстракция
Фон. Предыдущие сообщения продемонстрировали, что кардиотонические стероиды, подобные дигиталису (CTS), вносят вклад в патогенез терминальной стадии почечной недостаточности. Целью настоящего исследования было определить природу CTS у пациентов с хронической болезнью почек (CKD) и у крыс с частичной нефрэктомией (PNx).
Методы. У пациентов с ХБП и у здоровых людей мы определили уровни маринобуфагенина (МБГ) и эндогенного уабаина (ЭО) в плазме крови, а также активность Na / K-АТФазы эритроцитов в отсутствие и в присутствии моноклональных антител (mAb) против 3E9 против MBG. и Digibind. Уровни MBG и EO также определяли у крыс Sprague-Dawley, подвергшихся ложной операции, и у крыс после 4 недель PNx.
Результаты. У 25 пациентов с плазмой ХБП уровень МБГ, но не ЭО был повышен (0.86 ± 0,07 против 0,28 ± 0,02 нмоль / л, P <0,01), а Na / K-АТФаза эритроцитов ингибировалась (1,24 ± 0,10 против 2,80 ± 0,09 мкмоль Pi / мл / ч, P <0,01) по сравнению с таковой у 19 здоровых предметы. Ex vivo , mAb 3E9 восстанавливали Na / K-АТФазу в эритроцитах пациентов с ХЗП, но не влияли на Na / K-АТФазу у контрольных субъектов. После хроматографического фракционирования уремической плазмы по сравнению с нормальной плазмой конкурентный иммуноанализ, основанный на mAb против MBG, обнаружил 3-кратное увеличение уровня эндогенного материала, имеющего время удерживания, подобное тому, которое наблюдается для MBG.Аналогичная картина изменения CTS наблюдалась у уремических крыс. По сравнению с ложнооперированными животными, крысы PNx демонстрировали в 3 раза повышенные уровни МБГ, но не ЭО.
Выводы. При хронической почечной недостаточности повышенные уровни буфадиенолида CTS, MBG, способствуют ингибированию Na / K-АТФазы и могут представлять собой потенциальную мишень для терапии.
Ключевые слова: хроническая почечная недостаточность, маринобуфагенин, моноклональные антитела, Na / K-АТФаза, уабаин
Введение
Одним из факторов, участвующих в патогенезе хронической почечной недостаточности, является повышенная концентрация в кровотоке эндогенных кардиотонических стероидов (CTS ), т.е. эндогенные лиганды Na / K-АТФазы [1, 2]. CTS, принадлежащие к классам карденолидов [например, эндогенный уабаин (ЭО)] и буфадиенолиды [например, маринобуфагенин (МБГ) и телоцинобуфагин] действуют как физиологические регуляторы активности натриевого насоса и участвуют в регуляции натрийуреза и тонуса сосудов [2]. Совсем недавно было показано, что CTS вносит вклад в про-гипертрофическую и профибротическую передачу сигналов клеток [3]. Мы продемонстрировали, что у крыс с частичной нефрэктомией (PNx) диастолическая дисфункция и фиброз сердца сопровождаются повышенными уровнями МБГ в плазме; мы также отметили повышенные уровни маркеров окислительного стресса в сердце и плазме, а также другие доказательства передачи сигналов через Na / K-ATPase, такие как активация Src и MAPK [4–6].В этих исследованиях хроническое введение МБГ нормотензивным крысам для достижения аналогичных концентраций МБГ в плазме, наблюдаемых при PNx, приводило к очень похожему сердечному фенотипу, наблюдаемому при PNx. Напротив, активная иммунизация крыс PNx против MBG резко снижает гипертрофию сердца и фиброз, а также свидетельствует о передаче сигналов Na / K-ATPase, включая снижение левого желудочка и системных уровней окислительного стресса [4–6].
Приведенные выше данные позволяют предположить, что иммунонейтрализация CTS может быть перспективной для лечения хронической болезни почек (ХБП) и уремической кардиомиопатии.Поскольку данные о природе CTS, участвующей в хронической почечной недостаточности, противоречивы [6–9], нашей целью было определить, повышается ли ЭО, МБГ или оба эти фактора при уремии. Чтобы ответить на этот вопрос, мы определили уровни CTS в плазме у пациентов с ХБП и крыс PNx с помощью иммуноанализа MBG на основе моноклональных антител (mAb) и двух тестов EO, основанных на антителах с различной перекрестной реактивностью, а также анализа с использованием Digibind. в качестве первичного антитела. Ранее было продемонстрировано, что Digibind ™ (Fab-фрагменты антител к дигоксину овцы) как связывает эндогенный CTS, так и снижает артериальное давление у пациентов с преэклампсией, синдромом, связанным с повышенным уровнем CTS [10–12].Мы также сравнили способность антител против MBG и против уабаина взаимодействовать с материалом CTS из уремической плазмы человека после его фракционирования на колонках для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой.
Методы
Исследования на людях
Протокол исследования на людях был одобрен Научным советом Медицинской академии им. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия, и институциональным наблюдательным советом Исследовательского института Медстар, Вашингтон, округ Колумбия. Двадцать пять пациентов с ХБП, получающих лечение хроническим диализом в отделении хронического диализа Медицинской академии им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург.Санкт-Петербург, Россия, и 19 здоровых добровольцев (Медицинская академия им. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия) были включены в это исследование. Из пациентов 20 находились на гемодиализе (HD) и 5 на хроническом амбулаторном перитонеальном диализе (CAPD). Причиной ХБП были хронический гломерулонефрит (12 пациентов), пиелонефрит (4 пациента), поликистоз почек (4 пациента), врожденная дисплазия почек (1 пациент), сахарный диабет (3 пациента) и амилоидоз (1 пациент). Пациенты на HD получали три раза в неделю стандартный бикарбонатный диализ с синтетическими мембранами.Все пациенты, получавшие CAPD, получали четыре смены в день стандартного перитонеального диализата объемом 2 л, содержащего различные количества декстрозы (1,5, 2,5 или 4,25%) в зависимости от их объемного статуса. Двенадцать пациентов получали эритропоэтин и 16 принимали гипотензивные препараты (ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента, блокаторы кальциевых каналов, альфа- и бета-блокаторы). Ни один из испытуемых никогда не принимал препараты наперстянки. Клинические характеристики пациентов и контрольных субъектов суммированы в.
Таблица 1.
Характеристики субъектов исследования ^a
927 лет.
TY – JOUR
Т1 – эндогенные кардиотонические стероиды при хронической почечной недостаточности.
AU – Колмакова Елена В,
AU – Халлер, Стивен Т,
AU – Кеннеди, Дэвид Дж.,
AU – Исачкина Алина Н,
AU – Будный, Георг V,
AU – Фролова Елена В,
AU – Пьеха, Гжегож,
AU – Никитина Елена Р,
AU – Малхотра, Дипак,
AU – Федорова Ольга В,
AU – Шапиро, Иосиф I,
AU – Багров Алексей Юрьевич,
1-й год – 2011/02/03 /
PY – 2011/2/5 / entrez
PY – 2011/2/5 / pubmed
PY – 2012/1/20 / medline
SP – 2912
EP – 9
JF – Нефрология, диализ, трансплантация: официальное издание Европейской ассоциации диализа и трансплантологии – Европейская почечная ассоциация
JO – Циферблатная трансплантация нефрола
ВЛ – 26
ИС – 9
N2 – ИСТОРИЯ ВОПРОСА: Предыдущие отчеты продемонстрировали, что подобные дигиталис кардиотонические стероиды (CTS) вносят вклад в патогенез терминальной стадии почечной недостаточности.Целью настоящего исследования было определить природу CTS у пациентов с хронической болезнью почек (CKD) и у крыс с частичной нефрэктомией (PNx). Методы. У пациентов с ХБП и у здоровых людей мы определили уровни маринобуфагенина (МБГ) и эндогенного уабаина (ЭО) в плазме крови, а также активность Na / K-АТФазы эритроцитов в отсутствие и в присутствии моноклональных антител 3E9 к МБГ (mAb ) и Digibind. Уровни MBG и EO также определяли у крыс Sprague-Dawley, подвергшихся ложной операции, и у крыс после 4 недель PNx.РЕЗУЛЬТАТЫ: У 25 пациентов с плазмой ХБП уровень МБГ, но не ЭО был увеличен (0,86 ± 0,07 против 0,28 ± 0,02 нмоль / л, P <0,01), а Na / K-АТФаза в эритроцитах ингибировалась (1,24 ± 0,10 против 2,80 ± 0,09 мкмоль Pi. / мл / ч, P <0,01) по сравнению с 19 здоровыми людьми. Ex vivo mAb 3E9 восстанавливали Na / K-АТФазу в эритроцитах пациентов с ХБП, но не влияли на Na / K-АТФазу у контрольных субъектов. После хроматографического фракционирования уремической плазмы по сравнению с нормальной плазмой конкурентный иммуноанализ, основанный на mAb против MBG, обнаружил 3-кратное увеличение уровня эндогенного материала, имеющего время удерживания, подобное тому, которое наблюдается для MBG.Аналогичная картина изменения CTS наблюдалась у уремических крыс. По сравнению с ложнооперированными животными, крысы PNx демонстрировали в 3 раза повышенные уровни МБГ, но не ЭО. ВЫВОДЫ. При хронической почечной недостаточности повышенные уровни буфадиенолида CTS, MBG, способствуют ингибированию Na / K-АТФазы и могут представлять собой потенциальную мишень для терапии.
SN - 1460-2385
UR - https://neuro.unboundmedicine.com/medline/citation/212/endogenous_cardiotonic_steroids_in_chronic_renal_failure_
L2 – https: // Acade.oup.com/ndt/article-lookup/doi/10.1093/ndt/gfq772
БД – ПРЕМЬЕР
DP – Unbound Medicine
ER –
Балетный факультет Био | Елена Куникова
Елена Куникова
Елена Куникова – известный знаток русского классического балета. Она окончила Академию балета имени Вагановой, школу балета Мариинского театра в Санкт-Петербурге, Россия. Как балерина балета Михайловского театра Санкт-Петербурга, она исполнила разнообразный репертуар классических и современных балетов, в том числе Жизель , Щелкунчик , Кармен , Эсмеральда , Пахита , Лебединое озеро , . , Антоний и Клеопатра , Макбет и многие другие. С момента переезда в США Елена ставила классические произведения, такие как Дон Кихот , Жизель , Спящая красавица , Les Sylphides , Grand Pas из Paquita , Little Humpback Horse , Esmeralda , Esmeralda , , Grand Pas de Quatre , Pas des Odalisque , которые исполнялись на самых известных сценах мира, включая Центр Нью-Йорка, Театр Джойс, Парижский Театр де Шатле, Лондонский Павлин и Немецкую оперу Берлина.
За последние двадцать лет Елена поставила большую часть текущего репертуара Les Ballet Trockadero, за который Лондонский кружок критиков присудил труппе престижную награду «Лучший классический репертуар». Елена была представлена во многих профессиональных публикациях и документальных фильмах, ее работы были показаны в сериале BBC / CW «Breaking Pointe», снятом во время ее постановки Grand Pas из Paquita для Ballet West. Последнее произведение Елены, одноактный балет Divertimento , был исполнен по заказу Театра танца Гарлема и позже принят Ballet West II.
Ученики Елены танцуют с ведущими труппами мира, они отлично выступают на балетных конкурсах и неизменно получают признание за свои технические и артистические достижения. Среди ее педагогических занятий были «Шаги на Бродвее», Школа американского балета, Джульярд, Колледж Барнарда (технические и академические курсы), Берлинский балет, Театр танца Гарлема, Балет Вест, Молодежный балет Центральной Пенсильвании, Балет Канзас-Сити и другие.
Елену часто приглашают преподавать в магистратуре, проводить семинары по классическому балетному репертуару, участвовать в симпозиумах и панельных дискуссиях.Она также участвовала в Dance Magazine , Pointe и Wall Street Journal Europe в качестве писателя.

.Добавить комментарий Отменить ответ
Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *
Комментарий *
Имя *
Email *
Сайт

Навигация по записям
Previous Previous post: Миниатюра в театре это: «Миниатю́ра» — происхождение и значение слова
Next Next post: Сказка репка старая сказка на новый лад: Старая сказка на новый лад “Репка”

Рубрики
1 класс
10 класс
10 лет
11 лет
12 лет
2 класс
3 класс
4 класс
5 класс
5 лет
6 класс
6 лет
7 класс
7 лет
8 класс
8 лет
9 класс
9 лет
Задания 1 класс
Задания 2 класс
Задания 3 класс
Задания 4 класс
Задания 5 класс
Задания 6 класс
Задания 7 класс
Задания 8 класс
Задания 9 класс
Обучение 10 класс
Разное
Ребёнку 10 лет
Ребёнку 11 лет
Ребёнку 12 лет
Ребёнку 5 лет
Ребёнку 6 лет
Ребёнку 7 лет
Ребёнку 8 лет
Своими руками
2025 © Все права защищены.
Контроль ( n = 19) CKD ( n = 25)
46,5 ± 2,4 52,8 ± 3,7
Пол (мужской / женский) 9/10 14/11
Масса тела (кг) 68 ± 3 71 ± 2
HD / CAPD n.а. 20/5
Креатинин сыворотки (мкмоль / л) 86 ± 2 848 ± 45 ^*
Na сыворотки (ммоль / л) 141 ± 1
К сыворотки (ммоль / л) 4,3 ± 0,1 5,3 ± 0,1 ^*
Систолическое артериальное давление (мм рт. давление (мм рт. Na / K-АТФаза в цельных эритроцитах пациентов с ХБП и контрольных субъектов определялась, как сообщалось ранее [13].Эффекты in vitro mAb против MBG 3E9 и Digibind (Glaxo SmithKline) на Na / K-АТФазу эритроцитов изучали в эритроцитах пациентов с ХБП. Моноклональные антитела против MBG 3E9 использовали в концентрации 50 мкг / л, что, in vitro, , обращало индуцированное MBG 75% ингибирование Na / K-АТФазы в почках крыс (изоформа α-1) и in vivo снижало кровь давление у гипертонических крыс Dahl-S [14]. Дигибинд использовался в концентрации 10 мкг / мл, что находится в том же диапазоне, что и дозы Дигибинд, которые ранее применялись для лечения пациентов с преэклампсией [10–12].Аликвоты цельной крови (0,5 мл) предварительно инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин в присутствии и в отсутствие mAb 3E9 или Digibind. Эритроциты трижды промывали изотонической средой (145 ммоль / л NaCl в 20 ммоль / л Трис-буфера; pH 7,6 при 4 ° C) и определяли активность Na / K-АТФазы. Эритроциты предварительно инкубировали с Твин-20 (0,5%) в сахарозе (250 ммоль / л) и Трис-буфером (20 ммоль / л, pH 7,4, 37 ° C) в течение 30 минут и инкубировали в течение 30 минут в среде, содержащей (в ммоль / л) NaCl 100, KCl 10, MgCl ₂ 3, ЭДТА 0.5, Трис 50 и АТФ 2 (pH 7,4, 37 ° C) в конечном разведении 1:40. Реакцию останавливали добавлением трихлоруксусной кислоты до конечной концентрации 7%. Общую активность АТФазы измеряли по продукции неорганического фосфата (Pi), а активность Na / K-АТФазы оценивали как разницу между активностью АТФазы в присутствии и в отсутствие 5 ммоль / л уабаина.
Исследования на животных
Все эксперименты на животных, описанные в этой статье, проводились в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здравоохранения США по протоколам, утвержденным Комитетом по уходу и использованию институциональных животных Университета Толедо.Для этих исследований использовали самцов крыс Sprague – Dawley (250–300 г). Контрольную группу составили восемь крыс с ложной нефрэктомией. У 18 крыс PNx выполняли, как описано ранее [4]. Этот маневр вызывает стойкую гипертензию в течение 2 недель. Через 5 недель после PNx этих крыс умерщвляли. Образцы плазмы хранили при -80 ° C для определения CTS. Артериальное давление определяли с использованием метода хвостовой манжеты IITC, Inc. (модель усилителя 229, модель монитора 31, испытательная камера, модель 306; IITC Life Science, Woodland Hills, CA).
Измерение креатинина
Креатинин плазмы измеряли колориметрическим методом с использованием коммерческого набора от Teco Diagnostics (№ по каталогу C515-480; Анахайм, Калифорния). Стандарты креатинина или образцы плазмы смешивали с реагентом пикриновой кислоты и реагентом креатининового буфера, входящим в комплект. Значение OD при 510 нм измеряли сразу после и через 15 мин. Различия между двумя временными точками были использованы для расчета концентраций креатинина.
Маркеры окислительного стресса
Концентрация общего карбонила белка в плазме и гомогенате левого желудочка в качестве маркера окислительного стресса [15] была определена с помощью иммуноферментного анализа с использованием набора BIOCELL PC Test (Northwest Life Science Specialties).
CTS-иммуноанализы
Для измерения CTS образцы плазмы экстрагировали с использованием картриджей C18 SepPak (Waters Inc., Кембридж, Массачусетс) [16]. Картриджи активировали 10 мл ацетонитрила и промывали 10 мл воды. Затем образцы плазмы объемом 0,5 мл наносили на картриджи и последовательно элюировали 7 мл 20% ацетонитрила, а затем 7 мл 80% ацетонитрила в том же флаконе, что обеспечивает элюирование материала с более низкой и высокой полярностью соответственно и позволяет проводить измерения различных CTS в выборке [16].После элюирования образцы сушили в вакууме и хранили при -50 ° C. Перед иммуноанализом образцы восстанавливали в исходном объеме буфера для анализа. MBG измеряли с помощью флюороиммуноанализа [ассоциативно-усиленный флуоресцентный иммуноанализ (DELFIA)] на основе мышиных mAb 4G4 против MBG, недавно подробно описанных [14]. Этот анализ основан на конкуренции между иммобилизованным антигеном (MBG-гликозид-тиреоглобулин) и MBG, другими перекрестными реагентами или эндогенными CTS в образце за ограниченное количество сайтов связывания на mAb против MBG.Вторичное (козье антимышиное) антитело, меченное нерадиоактивным европием, было получено от Perkin-Elmer (Waltham, MA). Анализы ЭО были основаны на аналогичном принципе с использованием конъюгата уабаин-овальбумин и двух антисывороток к уабаину (анти-OU-S, 1: 100 000 и анти-OU-M, 1:20 000), полученных от кроликов, иммунизированных уабаином-бычьем. конъюгат сывороточного альбумина (BSA) (анти-OU-S) или смесь конъюгатов уабаин-BSA и уабаин-РНКаза (анти-OU-M). Уровни дигоксин-подобной иммунореактивности в плазме определяли с помощью конкурентного иммуноанализа на основе Digibind [14].Поскольку уровни «иммунореактивности дигоксина» у индивидуума (неконцентрированные), образцы в этом анализе выходят за рамки его чувствительности, уровни дигоксин-подобного иммунореактивного материала в плазме крови пациентов с ХБП и крысами PNx были определены в образцах, которые были объединены ( n = 6), извлеченный из патронов С18 и сконцентрированный в 10 раз. Для этого иммуноанализа на дигоксин мы пометили первичное антитело (Digibind; Glaxo SmithKline, King of Prussia, PA), используя набор для маркировки европием (Perkin-Elmer).Анализ основан на конкуренции между CTS в образце и конъюгатом дигоксин-BSA, иммобилизованным на дне полосок для иммунопреципитации, за ограниченное количество сайтов связывания Digibind (0,125 мкг / лунку). Чувствительность иммуноанализа Digibind к дигоксину составила 0,01 нмоль / л. В отдельном эксперименте мы объединили аликвоты контрольных образцов плазмы объемом 50 мкл, добавили 0,25 мл образцов объединенной плазмы с увеличивающимися концентрациями МБГ (0,125–2 нмоль / л), экстрагировали образцы на картриджах C18 SepPak, как описано выше, и определили уровни МБГ и уабаин-подобной иммунореактивности с использованием анализов, основанных на антителах «S» и «M» против уабаина.
Данные о перекрестной реактивности каждого анализа и калибровочные кривые из иммуноанализов, иллюстрирующие перекрестную реактивность каждого антитела с МБГ, уабаином и дигоксином, представлены в и, соответственно. МБГ и телоцинобуфагин (чистота по данным ВЭЖХ> 98%) были очищены из секрета околоушных желез жаб Bufo marinu s, как сообщалось ранее [13]. Буфалин, цинобуфагин, цинобуфаталин и уабаин были приобретены у Sigma Chemicals (Сент-Луис, Миссури). Проскилларидин А и резибуфагенин были получены от Axxora LLC (Сан-Диего, Калифорния), а маринобуфотоксин был щедрым подарком доктора.Винсент П. Батлер, медицинский факультет Колледжа врачей и хирургов Колумбийского университета, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк.
Таблица 2.
Перекрестная иммунореактивность антител против MBG и против уабаина
4G470b Anti-MBG8
1 анти-связывание 4G4 ( A ) и 3E9 ( B ) mAb, антисыворотка против уабаина S ( C ), антисыворотка против уабаина M ( D ) и Digibind ( E ) к конъюгированным антигенам с помощью кардиотонических стероидов в конкурентные флюороиммуноанализы.
Высокоэффективная жидкостная хроматография
Объединяли 50 мкл алликвот уремических или контрольных образцов плазмы. Объединенную нормальную или уремическую плазму (0,5 мл) экстрагировали на картриджах C18 SepPak, как описано выше, сушили в вакуумной центрифуге и фракционировали на жидкостной хроматографической системе Agilent 1100 series. В частности, это включало использование Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 (Agilent Technologies, Пало-Альто, Калифорния), 4,6–150 мм, размер частиц 5 мкм, колонка 80 °, скорость потока 1 мл / мин и линейная (10 –85.5%) градиент ацетонитрила против 0,1% трифторуксусной кислоты (TFA) в течение 45 мин. Тридцать 1,5-минутных фракций были собраны и проанализированы на иммунореактивность МБГ и уабаина.
Статистический анализ
Результаты представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего. Данные были проанализированы с использованием одностороннего дисперсионного анализа с последующим тестом Ньюмана-Кеулса и двусторонним тестом t (если применимо) (программное обеспечение GraphPad Prism, Сан-Диего, Калифорния). Двустороннее значение P <0,05 считалось статистически значимым.
Результаты
Пациенты с ХБП существенно не отличались от контрольной группы по возрасту, полу и массе тела (). Как представлено в, пациенты с ХБП имели в 3,5 раза больший уровень МБГ в плазме по сравнению с контрольной группой. Когда концентрации ЭО определялись с помощью анализа, основанного на антителе М против уабаина, уровни этого гормона у пациентов с ХЗП не отличались от контрольных значений, но анализ, основанный на антителе S, которое проявляет перекрестную иммунореактивность с буфадиенолидами, обнаружил почти 2 -кратное повышение ЭО у пациентов с хронической почечной недостаточностью.Анализ, основанный на Digibind, не обнаружил иммунореактивности в отдельных образцах плазмы как от CKD, так и от контрольной группы (данные не показаны). Когда образцы из каждой группы были объединены и сконцентрированы в 10 раз, уровни CTS, измеренные с помощью флуоресцентного иммуноанализа Digibind у пациентов с ХЗП, были увеличены в 4 раза по сравнению с контрольной группой, что было пропорционально наблюдаемому увеличению уровней МБГ в плазме, наблюдаемому у пациентов. эти пациенты (). Чтобы подтвердить, что антитело против уабаина S действительно проявляет большую перекрестную реактивность с MBG по сравнению с антителом против уабаина M, мы объединили аликвоты контрольной плазмы, добавили в нее MBG (), экстрагировали их на картриджах C18 SepPak и определили уровни МБГ и уабаин-подобной иммунореактивности с использованием обоих антител против уабаина.Как представлено на фиг.4, антитело S против уабаина обнаруживает повышение уровней МБГ намного лучше, чем антитело против уабаина M.
Уровни МБГ в плазме, измеренные с использованием 4G4 mAb против MBG ( A ), и ЭО, измеренные с использованием антител против Антисыворотки к уабаину M ( B ) и S ( C ) у здоровых контролей (Ctrl) и у пациентов с ХБП. ( D ) Определение уровней CTS в объединенных образцах плазмы от Ctrl и CKD с использованием конкурентного флюороиммуноанализа на основе Digibind.Средние ± SEM. Двусторонний т -тест. Определение иммунореактивности MBG (4G4 mAb) ( E ) и иммунореактивности уабаина, определяемой с использованием антисывороток M и S против уабаина ( F ) в объединенных образцах плазмы от здоровых контролей с добавлением MBG (0,125, 0,25, 0,5, 1,0 и 2 нмоль / л).
демонстрируют элюцию эндогенного MBG-иммунореактивного материала из контрольной плазмы из колонки для ВЭЖХ Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18. Стандарт МБГ элюируется во фракции 16, как указано на графиках стрелкой.Эндогенный MBG-иммунореактивный материал из нормальных клеток, определенный с использованием как 4G4, так и 3E9 анти-MBG mAb, элюировался во фракциях 9–29 с характерным пиком иммунореактивности, элюируемым во фракции 16, который совпадал со временем элюирования стандарта MBG. После фракционирования с помощью ВЭЖХ уровней MBG в уремической плазме иммунореактивность, элюируемая во фракции 16, показала существенное увеличение по сравнению с контрольной плазмой (). Величина этого увеличения была пропорциональна величине повышения уровня МБГ в плазме у пациентов с ХЗП.
Характер элюции эндогенного МБГ и иммунореактивности уабаина после фракционирования экстрактов нормальной плазмы человека ( A , C , E и G ) и уремической плазмы человека ( B , D , F и H ) на колонке для ВЭЖХ с обращенной фазой в линейном градиенте ацетонитрила (пунктирная линия). Время удерживания стандартов МБГ и уабаина (OU) указано стрелками.
Как представлено в, максимум эндогенного оуабаин-иммунореактивного материала, обнаруживаемый как S-, так и M-антителами против уабаина, элюируется из колонки для ВЭЖХ во фракции 6, что соответствует стандарту элюирования уабаина.После фракционирования уремической плазмы с помощью ВЭЖХ оба антитела против уабаина не выявили увеличения уровней ЭО во фракции ВЭЖХ, элюируемой во фракции 6. Антитело М против уабаина обнаружило умеренное увеличение иммунореактивности уабаина, элюируемое во фракциях 9–16. , в то время как антитело S обнаружило значительное увеличение иммунореактивности уабаина, элюируемой во фракциях 11-17 (), что перекрывается со временем элюирования МБГ и других буфадиенолидных CTS (телоцинобуфагин, фракция 14; МБГ, фракция 16; цинобуфаталин, фракция 16 и буфалин, фракция 17).
Как представлено в, у пациентов с ХБП активность Na / K-АТФазы в эритроцитах подавлялась на 56% по сравнению с контрольной группой и отрицательно коррелировала с плазменными концентрациями МБГ (), но не ЭО ( r = 0,34, P = 0,30 для ЭО, измеренного с антителом M, и r = 0,45, P = 0,16 для ЭО, измеренного с антителом S). Обработка ex vivo эритроцитов пациентов с ХБП с помощью mAb 3E9 против MBG и дигибинд приводила к частичному, но значительному восстановлению активности Na / K-АТФазы ().Примечательно, что обработка ex vivo антителом 3E9 существенно не изменяла активность Na / K-АТФазы в эритроцитах контрольных субъектов.
( A ) Na / K-АТФаза эритроцитов у здоровых контрольных субъектов и у пациентов с ХБП в отсутствие и в присутствии Digibind и 3E9 mAb против MBG. Средние ± SEM. Односторонний дисперсионный анализ с последующим тестом Ньюмана – Кеулса. ( B ) Корреляция между уровнями МБГ в плазме и активностью Na / K-АТФазы в эритроцитах у пациентов с ХБП.Двусторонний т -тест.
Чтобы определить, соответствуют ли изменения CTS у крыс PNx изменениям, наблюдаемым у пациентов с ХБП, мы затем определили уровни иммунореактивности МБГ, ЭО и дигоксина у интактных крыс Sprague-Dawley у животных с почечной недостаточностью. У крыс Sprague-Dawley PNx приводил к заметному увеличению креатинина в плазме, развитию гипертонии и окислительного стресса, что оценивалось по уровням карбонилированного белка в плазме и сердце (2). Как показано на фиг. 5, паттерны изменений уровней CTS в плазме у крыс PNx были идентичны тем, которые наблюдались у пациентов с ХЗП.У крыс Sprague-Dawley PNx сопровождался значительным повышением уровня MBG, измеренного с помощью 4G4 mAb, и EO, определенного с использованием антисыворотки S, но не антисыворотки M. Анализ дигоксина DELFIA на основе Digibind обнаружил повышенные уровни CTS в объединенных 10-кратно концентрированных образцах плазмы из PNx по сравнению с контрольными крысами. Как и у пациентов с ХБП, у крыс PNx величина повышения CTS в плазме, определенная с помощью Digibind, была пропорциональна значению, определенному с помощью анализа, основанного на mAb против MBG 4G4.
Таблица 3.
Физиологические измерения после PNx ^a
Перекрестные реагенты Перекрестная иммунореактивность антител (%)
mAb против MBG 3E9 Digibind Сыворотка против уабаина S Сыворотка против уабаина M
Маринобуфагенин 100 100 0.2 7 0,05
Маринобуфотоксин 43 4 0,5 1,6 0,06
Телоцинобуфагин 7 Цинобуфоталин 40 44 4,3 0,3 0,02
Цинобуфагин 0,07 1,4 0,02 0.5 0,02
Резибуфагенин 0,5 0,5 0,8 7 0,15
Буфалин 0,08 <0,001 3 1,3 0,2 0,03
Уабаин 0,005 0,02 0,4 100 100
100 100
<0,001 0,1 25 52
Дигоксин 0,03 1,8 100 0,1 1,5
0,0138
0,015 1,5 0,47
Альдостерон <0,01 <0,01 <0,01 0,01 0,04
Прогестерон <0.01 <0,01 <0,01 0,08 0,002
Преднизон <0,001 <0,001 <0,01 0,07 <0,01 0,07 0,001
6 0,26138 927.03 Переменная Имитация ( n = 8) PNx ( n = 6)
Креатма 0,3, мг Плазма ± 0,07 0,64 ± 0,03 ^*
Систолическое артериальное давление 110 ± 5 189 ± 14 ^*
HW / BW, × 10 ² 0,36 ± 0,03 ^*
Карбонилированный белок левого желудочка, пмоль / мг белка 319 ± 7 514 ± 20 ^*
Карбонилированный белок плазмы 1713827, пмоль 927 ± 9 320 ± 20 ^*
CTS у крыс с почечной недостаточностью. Уровни MBG в плазме измеряли с использованием 4G4 анти-MBG mAb ( A ) и EO измеряли с использованием антисывороток M ( B ) и S ( C ) у искусственно оперированных (Sham) и PNx крыс.( D ) Определение уровней CTS в объединенных образцах плазмы от Sham и PNx с использованием конкурентного флюороиммуноанализа на основе Digibind. Средние ± SEM. Двусторонний т -тест.
Обсуждение
Основные результаты настоящего исследования заключаются в том, что уровни CTS у пациентов и экспериментальных крыс с хронической почечной недостаточностью демонстрируют схожую картину изменений и что MBG, а не EO, увеличивается и способствует ингибированию Na / K-АТФазы. в ХБП. Поскольку при хронической почечной недостаточности CTS представляют собой потенциально важные терапевтические мишени, важность определения природы CTS, участвующей в патогенезе ХБП, очевидна.Повышение CTS у уремических субъектов [17] и у крыс PNx [18, 19] было обнаружено давно, и обнаружение ложноположительной иммунореактивности наперстянки в уремической сыворотке было одним из первых открытий, указывающих на важность эндогенных дигиталисоподобных CTS в объемная гипертензия и почечная недостаточность [17]. Данные о природе CTS, вовлеченной в хроническую почечную недостаточность, противоречивы. Нарусэ и др. [7] сообщил о повышенных уровнях иммунореактивности уабаина в плазме у уремических субъектов.Недавно Stella et al. [9] продемонстрировали, что уровни ЭО в плазме пациентов с ХБП значительно превышали уровни, наблюдаемые у субъектов с нормальным АД в других исследованиях. Schoner et al. [20], однако, продемонстрировал, что уабаин-подобный CTS, который становится повышенным в уремической плазме, является более гидрофобным, чем уабаин, что согласуется с профилем элюирования МБГ из колонок для обращенно-фазовой ВЭЖХ в нашем настоящем () и предыдущем [14, 16] этюд. Соответственно, Tao et al. [21] продемонстрировали, что CTS, очищенная из перитонеального диализата пациентов с хронической почечной недостаточностью, проявляет повышенное сродство к α-1, а не к α2 / α-3 изоформам Na / K-АТФазы, что аналогично профилю ингибирования Na / Изоформы К-АТФазы по МБГ [22, 23]. Впоследствии, используя тесты, основанные на поликлональных антителах, мы продемонстрировали, что уровни МБГ, а не ЭО повышаются в плазме пациентов с ХБП [8].
В настоящем исследовании с использованием конкурентного иммуноанализа, основанного на моноклональных антителах, которые являются высокоспецифичными к буфадиенолиду CTS, мы демонстрируем, что уровни МБГ заметно увеличиваются как у пациентов с ХБП, так и у крыс после субтотальной нефрэктомии.В настоящем исследовании оба анти-MBG mAb, использованные для измерения CTS и для иммунонейтрализации ex vivo CTS, показали чрезвычайно низкую перекрестную реактивность с уабаином, и характер индуцированных уремией изменений уровней CTS был идентичным у обоих пациентов. с ХБП и крысами, подвергшимися PNx. В нашем исследовании для определения ЭО мы использовали два антитела против уабаина: антисыворотку S, которая проявляет значительную перекрестную иммунореактивность с буфадиенолидом CTS, включая MBG, и антисыворотку M, которая не реагирует перекрестно с буфадиенолидами ().Мы обнаружили, что как у уремических пациентов, так и у крыс PNx, повышение ЭО выявлялось антителом S, но не антителом M. Примечательно, что после фракционирования уремической плазмы с помощью ВЭЖХ антитело M против уабаина перекрестно реагировало с материалом, совместно элюирующимся с аутентичным уабаином, в то время как Антитело S против уабаина в дополнение к менее полярному материалу, коэлюлированному с уабаином, также взаимодействовало с более полярными фракциями ВЭЖХ, которые перекрывались с фракциями, содержащими высокие уровни иммунореактивности MBG. Эти наблюдения не согласуются с предыдущими данными о повышенных уровнях ЭО у пациентов с ХБП [7, 9] и предполагают, что именно МБГ, а не ЭО, увеличивается при почечной недостаточности.Следовательно, мы считаем, что именно МБГ представляет собой более логичную терапевтическую цель в этом состоянии, особенно учитывая, что у крыс PNx активная иммунизация против МБГ снижает уровень сердечного оксидативного стресса и фиброза [5], отличительных признаков уремической кардиомиопатии [24, 25]. . Следует отметить, что в предыдущих исследованиях, демонстрирующих повышенные уровни ЭО у пациентов с ХБП и у крыс PNx, данных о перекрестной реактивности антител против уабаина и буфадиенолида CTS не сообщалось [7, 9, 20]. Учитывая значительную вариабельность уровней ЭО в плазме, о которых сообщают различные группы [26], стандартизация «собственных» анализов CTS и разработка надежных коммерческих иммуноанализов, предпочтительно основанных на моноклональных антителах, будет иметь важное значение для последующих клинических исследований эндогенных лигандов натриевой помпы. .
Ранее мы продемонстрировали, что у пациентов с повышенным уровнем преэклампсии в плазме уровни МБГ были связаны с ингибированием Na / K-АТФазы в эритроцитах, которое было обратимым как мАт 3E9, так и Digibind [14], а также ингибированием преэклампсии в плаценте, буфадиенолидом CTS, включая MBG, а не EO, представляет собой цель для Digibind [27]. В настоящем исследовании как мАт 3E9, так и Digibind ex vivo восстанавливали активность Na / K-АТФазы в эритроцитах пациентов с ХБП. Кроме того, в настоящем исследовании уровни MBG в плазме показали отрицательную корреляцию с Na / K-ATPase, что указывает на причинную связь между повышенными уровнями MBG и ингибированием Na / K-ATPase у пациентов с CKD.Эти наблюдения согласуются с результатами нескольких предыдущих исследований, в которых было показано, что активность Na / K-АТФазы эритроцитов отражает плазменные уровни эндогенных [13, 14, 28, 29] и экзогенных [30–32] CTS, и в которых ex vivo инкубация плазмы в присутствии CTS-нейтрализующих антител обращала CTS-индуцированное ингибирование Na / K-АТФазы в эритроцитах у новорожденных [28], у людей во время произвольной гиповентиляции [13] и из-за нагруженного NaCl Dahl-S крысы [33]. Наши настоящие и предыдущие наблюдения, что Digibind выявляет повышенные уровни CTS в плазме у пациентов с ХЗП, отменяет индуцированное CTS ингибирование Na / K-АТФазы и снижает артериальное давление при экспериментальной гипертензии, индуцированной NaCl [14], предполагают, что Digibind может использоваться в клинических условиях для иммунонейтрализация повышенных уровней CTS у этих пациентов.
Благодарности
Эти исследования были поддержаны Программой внутренних исследований, Национальным институтом старения, Национальными институтами здравоохранения (NIH) (O.V.F., G.P. и A.Y.B.) и грантом NIH HL071556 (J.I.S.). Авторы благодарны Антону Бжелянскому, MA (Исследовательский институт MedStar, Хяттсвилл, Мэриленд) за советы и анализы методом ВЭЖХ.
Заявление о конфликте интересов. Не заявлено.
Список литературы
1. Уремическая кардиомиопатия Ритца Э. – эндогенная интоксикация дигиталисом? J Am Soc Nephrol.2006; 17: 1493–1497. [Google Scholar] 2. Багров А.Ю., Шапиро Ю.И. Эндогенный наперстянка: патофизиологические роли и терапевтические применения. Нат Клин Практ Нефрол. 2008; 4: 378–392. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 3. Багров А.Ю., Шапиро Ю.И., Федорова О.В. Эндогенные кардиотонические стероиды: физиология, фармакология и новые терапевтические мишени. Pharmacol Rev.2009; 61: 9–38. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Kennedy DJ, Vetteth S, Periyasamy SM, et al. Центральная роль кардиотонического стероида маринобуфагенина в патогенезе экспериментальной уремической кардиомиопатии.Гипертония. 2006. 47: 488–495. [PubMed] [Google Scholar] 5. Элькаре Дж., Кеннеди Д. Д., Яшасви Б. и др. Маринобуфагенин стимулирует выработку коллагена фибробластами и вызывает фиброз при экспериментальной уремической кардиомиопатии. Гипертония. 2007; 49: 215–224. [PubMed] [Google Scholar] 6. Элькарех Дж., Периясами С.М., Шидьяк А. и др. Маринобуфагенин индуцирует увеличение экспрессии проколлагена в процессе с участием протеинкиназы C и Fli-1: последствия для уремической кардиомиопатии. Am J Physiol Renal Physiol.2009; 296: F1219 – F1226. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7. Нарусэ К., Нарусэ М., Танабе А. и др. Происходит ли иммунореактивный уабаин в плазме крови из надпочечников? Гипертония. 1994; 23 (1 приложение): I102 – I105. [PubMed] [Google Scholar] 8. Гоник Х.С., Динг Й., Вазири Н.Д. и др. Одновременное измерение маринобуфагенина, уабаина и белка, связанного с гипертонией, при различных болезненных состояниях. Clin Exp Hypertens. 1998. 20: 617–627. [PubMed] [Google Scholar] 9. Стелла П., Манунта П., Малламачи Ф. и др.Эндогенный уабаин и кардиомиопатия у диализных пациентов. J Intern Med. 2008; 263: 274–280. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Goodlin RC. Антидигоксиновые антитела при эклампсии. N Engl J Med. 1988; 318: 518–559. [PubMed] [Google Scholar] 11. Adair CD, Buckalew V, Taylor K, et al. Повышенный эндоксиноподобный фактор, осложняющий многоплодную беременность во втором триместре: лечение дигоксин-связывающим иммуноглобулином. Am J Nephrol. 1996. 16: 529–531. [PubMed] [Google Scholar] 12. Adair CD, Luper A, Rose JC и др.Гемодинамические эффекты внутривенного дигоксин-связывающего fab иммуноглобулина при тяжелой преэклампсии: двойное слепое рандомизированное клиническое исследование. J Perinatol. 2009. 29: 284–289. [PubMed] [Google Scholar] 13. Багров А.Ю., Федорова О.В., Остин-Лейн Дж. Л. и др. Эндогенный маринобуфагенин-подобный иммунореактивный фактор и ингибирование Na +, K + АТФазы при произвольной гиповентиляции. Гипертония. 1995; 26: 781–788. [PubMed] [Google Scholar] 14. Федорова О.В., Симбирцев А.С., Колодкин Н.И. и др. Моноклональное антитело к эндогенному буфадиенолиду, маринобуфагенину, отменяет индуцированное преэклампсией ингибирование Na / K-АТФазы и снижает артериальное давление при гипертонии, чувствительной к NaCl.J Hypertens. 2008; 26: 2414–2425. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 15. Левин Р.Л., Уильямс Дж. А., Штадтман Э. Р. и др. Карбонильные анализы для определения окислительно модифицированных белков. Meth Enzymol. 1994; 233: 346–357. [PubMed] [Google Scholar] 16. Лопатин Д.А., Айламазян Е.К., Дмитриева Р.И. и др. Циркулирующие буфодиенолидные и карденолидные ингибиторы натриевой помпы при преэклампсии. J Hypertens. 1999; 17: 1179–1187. [PubMed] [Google Scholar] 17. Graves SW, Brown B, Valdes R., Jr. Эндогенное дигоксиноподобное вещество у пациентов с почечной недостаточностью.Ann Intern Med. 1983; 99: 604–608. [PubMed] [Google Scholar] 18. Хуот С.Дж., Памнани М.Б., Клаф Д.Л. и др. Роль потребления натрия, Na + -K + помпы и уабаин-подобного гуморального агента в генезе гипертензии с пониженной массой почек. Am J Nephrol. 1983; 3: 92–99. [PubMed] [Google Scholar] 19. Памнани МБ, Брайант Х.Дж., Хардер Д.Р. и др. Потенциалы гладкомышечных мембран сосудов у крыс с одной почкой, одним зажимом и пониженной почечной масс-солевой гипертензией: влияние ингибитора гуморального натриевого насоса. J Hypertens Suppl.1985; 3: S29 – S31. [PubMed] [Google Scholar] 20. Schoner W, Heidrich-Lorsbach E, Kirch U, et al. Очистка и свойства эндогенных уабаиноподобных веществ из гемофильтрата и надпочечников. J Cardiovasc Pharmacol. 1993; 22 (Приложение 2): S29 – S31. [PubMed] [Google Scholar] 21. Тао К.Ф., Сосински П.А., Холленберг Н.К. и др. Специфика объемно-чувствительного ингибитора натриевого насоса, выделенного из перитонеального диализата человека, при хронической почечной недостаточности. Kidney Int. 1996. 49: 420–429. [PubMed] [Google Scholar] 22.Федорова О.В., Багров А.Ю. Ингибирование Na / K-АТФазы из аорты крысы двумя эндогенными ингибиторами Na / K помпы, уабаином и маринобуфагенином. Доказательства взаимодействия с различными изоформами альфа-субъединиц. Am J Hypertens. 1997; 10: 929–935. [PubMed] [Google Scholar] 23. Федорова О.В., Колодкин Н.И., Агалакова Н.И. и др. Маринобуфагенин, эндогенный лиганд натриевого насоса α-1, у гипертензивных крыс, чувствительных к соли Даля. Гипертония. 2001; 37: 462–466. [PubMed] [Google Scholar] 24. Лондонский GM. Сердечно-сосудистые заболевания при хронической почечной недостаточности: патофизиологические аспекты.Semin Dial. 2003. 16: 85–94. [PubMed] [Google Scholar] 25. Химмелфарб Дж., Стенвинкель П., Икизлер Т.А. и др. Слон в уремии: оксидантный стресс как объединяющая концепция сердечно-сосудистых заболеваний при уремии. Kidney Int. 2002; 62: 1524–1538. [PubMed] [Google Scholar] 26. Николс М.Г., Льюис Л.К., Яндл Т.Г. и др. Уабаин, циркулирующий гормон, секретируемый надпочечниками, имеет решающее значение при сердечно-сосудистых заболеваниях. Факт или фантазия? J Hypertens. 2009; 27: 3–8. [PubMed] [Google Scholar] 27. Федорова О.В., Тапильская Н.И., Бжелянский А.М. и др.Взаимодействие Дигибинд с эндогенными кардиотоническими стероидами из преэкламптической плаценты. J Hypertens. 2010. 28: 361–366. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28. Боэро Р., Гуарена С., Дибат М.С. и др. Ингибирование насоса Na +, K + в эритроцитах после инфузии физиологического раствора у пациентов с существенно гипертензией: эффекты введения канренона. Int J Cardiol. 1989; 25 (Приложение 1): S47 – S52. [PubMed] [Google Scholar] 29. Balzan S, Montali U, Pieraccini L, et al. Стимулирующий эффект на поглощение рубидия-86 эритроцитами человека анти-сердечными гликозидными антителами.Q J Nucl Med. 1995. 39: 134–139. [PubMed] [Google Scholar] 30. Curd J, Smith TW, Jaton JC и др. Выделение дигоксин-специфических антител и их использование для нейтрализации эффектов дигоксина. Proc Natl Acad Sci USA. 1971; 68: 2401–2406. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 31. Хуанг В. Х., Аскари А. Na +, K + -АТФаза красных клеток: метод оценки степени ингибирования образца фермента, содержащего неизвестное количество связанного сердечного гликозида. Life Sci. 1975. 16: 1253–1261. [PubMed] [Google Scholar] 32.Камбербэтч М., Зареян К., Дэвидсон С. и др. Ранние и поздние эффекты лечения дигоксином на транспорт натрия, содержание натрия и Na + K + – АТФазу или эритроциты. Br J Clin Pharmacol. 1981; 11: 565–570. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Федорова О.В., Талан М.И., Агалакова Н.И. и др. Эндогенный лиганд альфа (1) натриевого насоса, маринобуфагенин, является новым медиатором гипертонии, зависимой от хлорида натрия. Тираж. 2002; 105: 1122–1127. [PubMed] [Google Scholar] PRIME PubMed | Эндогенные кардиотонические стероиды при хронической почечной недостаточности
Цитирование
Колмакова Елена В., и другие. «Эндогенные кардиотонические стероиды при хронической почечной недостаточности». Нефрология, диализ, трансплантация: официальная публикация Европейской ассоциации диализа и трансплантологии – European Renal Association, vol. 26, вып. 9, 2011, стр. 2912-9.
Колмакова Е.В., Халлер С.Т., Кеннеди Д.Д. и др. Эндогенные кардиотонические стероиды при хронической почечной недостаточности. Циферблатный трансплантат Нефрола . 2011; 26 (9): 2912-9.
Колмакова Э.В., Халлер С.Т., Кеннеди Д.Дж., Исачкина А.Н., Будный, Г. В., Фролова, Е. В., Пиеча, Г., Никитина, Е. Р., Малхотра, Д., Федорова, О. В., Шапиро, Дж. И., и Багров, А. Ю. (2011). Эндогенные кардиотонические стероиды при хронической почечной недостаточности. Нефрология, диализ, трансплантация: официальная публикация Европейской ассоциации диализа и трансплантологии – Европейская почечная ассоциация , 26 (9), 2912-9. https://doi.org/10.1093/ndt/gfq772
Колмакова Е.В., и др. Эндогенные кардиотонические стероиды при хронической почечной недостаточности. Циферблат нефрола. 2011; 26 (9): 2912-9. PubMed PMID: 212}}