Цель: создание настроя на учебную деятельность; воспитание у ребят любви к своей Родине, чувства гордости за свой народ, уважения к его великим свершениям и достойным страницам прошлого; закрепление и углубление исторических знаний, развитие и воспитание патриотических чувств на ярких примерах героизма нашей армии, храбрости и мужества народа.
Задачи:
Ход классного часа
Вступительное слово учителя. Слайд 1
– Здравствуйте уважаемые родители, дорогие ребята! Сегодня большой праздник – День знаний.
– Вначале давайте поприветствуем друг друга. В нашем классе 24 ученика – 12 девочек и 12 мальчиков. (Если есть вновь прибывшие ученики, учитель непременно должен их представить.)
– Давайте скажем друг другу самые нужные слова, а заодно и вспомним буквы.
Итак, я показываю букву, а вы называете слова на эту букву, которые отвечают на вопросы «какой? какая? какое?». (Родители помогают.)
– Все мальчики в нашем классе самые… Слайд 2(Учитель показывает букву «С». Сильные, симпатичные, справедливые, смешные, спортивные.)
– Все девочки в нашем классе самые… Слайд 3(Учитель показывает букву «К». Красивые, культурные, кокетливые, классные.)
– А родители в нашем классе самые… Слайд 4 (Учитель показывает букву «В». Взрослые, высокие, веселые, внимательные, вежливые.)
– А уроки самые… Слайд 5 (Учитель показывает букву «Д». Длинные, добрые, дружные, доверительные.). Молодцы, ребята.
– Сегодня – наш первый урок и говорить мы будем об очень серьезных и важных вещах.
Чтобы узнать о чем пойдет речь вы должны разгадать ребус и загадки.
Отгадайте загадку (РОДИНА)
Люблю поле и березки,
И скамейку под окном,
Заскучаю — вытру слезки,
Вспоминая о родном.
Никуда я не уеду,
Буду здесь работать, жить,
Сердцу место дорогое
Буду я всегда любить!
Место это знаю я,А вы знаете, друзья? Слайд 6 Без чего на белом свете
Взрослым не прожить и детям?
Кто поддержит вас, друзья?
Ваша дружная… (семья) Слайд 6
Слайд 7
– А что такое мир? Вы правы, мир это то, что нас окружает: трава, солнце, небо, деревья, птицы, жучки, паучки.
Но все же обратимся к словарю. Что же означает слово МИР? Слайд 8
Оказывается, 1 сентября празднуется не только День знаний, но в этот день во всем мире празднуется День мира. Слайд 9
1 сентября 1939 года 80 лет назад началась вторая мировая война. Много уроков извлекли из нее народы, но главным из них – что против войны нужно бороться, пока она не началась.
История нашей страны интересна и многообразна. Неоднократно наш народ отстаивал её от вражеских нападений. Одним из величайших событий была Великая Отечественная война с фашистами. Слайд 10
– Что вы знаете о Великой Отечественной Войне?
– Молодцы. Тема нашего классного часа «Будем помнить вечно…» Слайд 10
– Утро. Рассвет. За окнами тихо шумят деревья. В домах тишина. Мирно спят люди. И вдруг…
Звучит голос Левитана (аудиозапись о начале войны)
В воскресенье 22 июня 1941 года утреннюю тишину разорвали взрывы бомб и снарядов. Началась Великая Отечественная война…
Звучит песня «Вставай страна огромная…»
– Война не пощадила никого, она обрушилась на детей также, как на взрослых, – взрывами, голодом, холодом. Дальше – вой сирен, бомбежки, убежища, сожженные, разоренные дома, потеря близких. И чтобы не оказаться в фашистском рабстве, ради спасения Родины народ вступил в смертельный бой с жестоким, коварным и беспощадным врагом. Долгие 4 года до 9 мая 1945 года наши деды и прадеды боролись за освобождение родины от фашизма.
Во многих семьях сохранились солдатские треугольники-письма – это фронтовые письма, которые присылали с фронта отцы и деды, мужья и сыновья, братья. Они писали, что вернутся домой и только с победой. Слайды 21, 22
Решающей стала битва под Сталинградом (карта), которая длилась почти 200 суток. За это время Красная армия измотала, окружила и уничтожила 300-тысячную группировку фашистских войск. Слайд 23
После Сталинградской битвы закончилось победоносное наступление противника и началось их изгнание с нашей территории.
Наступил день, когда враг был сломлен и уничтожен окончательно. Красное Знамя Победы, водружённое советскими воинами на самом главном здании Германии — рейхстаге, возвестило всему миру о Великой Победе над фашизмом. Это произошло 9 мая 1945 года. Слайды 24, 25— Ребята, давайте «минутой молчания» почтим память всех погибших на этой страшной войне. (Все встают.) Слайд 26
Минута молчания
— Дети, родившиеся и выросшие после войны, должны знать, помнить и чувствовать значение этого трудного и героического времени, ценить подвиг народа, так как в этой войне погибло очень много людей. Ценить мир может только тот, кто помнит, что такое война!
Как вы думаете, что помогло выстоять нашему народу в этой великой битве? (Дружба народов, любовь к своей Родине.)
Верно, у каждого из вас своя дорога в жизни, свой путь, но пусть в сердце каждого из вас живет любовь к родной земле, родному краю, к родному городу и улице.
– Как вы думаете, можно ли назвать нашу страну одной семьей?
– А наш класс можно назвать семьей? Слайд 27
Учитель Вы верно считаете, что и наш класс можно назвать семьей. Конечно, мы не родственники, но мы видимся каждый день в школе и во дворе, вместе узнаем что-то новое, радуемся победам и огорчаемся из-за неудач. Хочется, чтобы наш класс остался такой семьей до окончания школы и стал еще дружнее.
Чтобы любая семья жила счастливо в ней должны царить
А насколько вы дружные, и помните правила поведения в школе, мы сейчас проверим. Слайд 28. Я читаю фразу, а вы её заканчиваете.
Утром рано в класс в оконце
К нам заглядывает (солнце)
Только входим в кабинет
Говорим мы всем (привет)
В нашем классе есть закон
Вход неряхам (запрещен)
Парта – это не кровать
И на ней нельзя (лежать)
На уроках не болтай
Как заморский (попугай)
Для рисования нужны нам краски,
А читать мы будем (сказки)
Ответить хочешь – не кричи,
А только руку (подними)
Чтоб 5-ку получить
Уроки надо всем (учить)
К доске вышел – не молчать
Урок быстрее (отвечать)
Учитель – Молодцы, ребята, правила поведения в школе и на уроке вы не забыли. Слайд 29
А я прочитаю для вас правила друзей.
1. Не отнимай чужого, поделись, чем можешь.
2. Не дерись – это очень стыдно.
3. Играй честно, не подводи и не обманывай своих товарищей.
4. Старайся быть всегда аккуратным и вежливым.
5. ПОМНИ! Ты не лучше всех, ты не хуже всех!
6. Ты – неповторимый для самого себя, родителей, учителей, друзей.
7. Чаще говори: давай дружить, давай играть, давай помогу.
8. Не ябедничай.
9. Будь добрым и щедрым на помощь, люби не только себя, но и других.
Вы согласны соблюдать эти правила.
– Подошёл к концу наш первый урок в новом учебном году. Слайд 30
Мы затронули сегодня с вами самые важные и серьезные в жизни темы. Хоть вы еще и дети, но если каждые человек на нашей планете с самого раннего возраста задумается о том, что самое главное в жизни мир, любовь, семья, дружба у нас никогда не будет войн.
Я желаю всем вам крепкого здоровья, успехов в учёбе. Очень надеюсь, что в школе вы будете вести себя достойно, будете дружными. Пусть все ваши знания, полученные в школе, остаются при вас и помогают вам преодолеть жизненные трудности.
В добрый путь, дорогие второклассники!
Классный час 2 класс. Тема: Беседа. Школьный дневник.
23.09.2014 6685 0Гильманшина Гелуза Галимовна,
учитель начальных классов
ГУ «Комаровская средняя школа»
Цель: познакомить учащихся со школьным дневником и научить их работать с ним, показать значение дневника в школьной жизни.
Оборудование: дневники, лучшие дневники-образцы учащихся.
ХОД КЛАССНОГО ЧАСА. I. Вступительное слово учителя.
Ребята! Сегодня на классном часе мы познакомимся с самым главным помощником и надежным товарищем ученика. А с кем вы узнаете, отгадав загадку.
В школьной сумке я лежу,
Как ты учишься, скажу. (Дневник)
– Что или кто такой? Кто догадался?
– Правильно!
У нас на школьной доске написано слово «дневник». Это значит, речь пойдет о самом главном документе школьника – школьном дневнике. Давайте посмотрим, какие могут быть школьные дневники. Я предоставляю слово своим бывшим ученикам, которые учатся сейчас в средних классах. Они пришли к нам со своими дневниками. Давайте дадим слово ребятам. (Ребята показывают свои дневники (выбрать лучшие), передают их ученикам для рассмотрения.) – Хотели бы вы иметь такой дневник? – А что нужно делать, чтобы иметь такой дневник? (Высказывания учащихся.)
II. Знакомство с требованиями ведения дневника.
Рассказ о требованиях к ведению дневника, объяснение ребятам, как необходимо заполнять дневник, какие графы есть в дневнике, на какие странички дневника необходимо обращать особое внимание. С помощью учителя учащиеся заполняют первые 3 страницы своего дневника.
III. Указание по ведению дневника.
1. Дневник является школьным документом учащегося. 2. Ученик заполняет лицевую сторону обложки, записывает название
предметов, фамилии, имена и отчества преподавателей, расписание
уроков, факультативных занятий, внеклассных и внешкольных
мероприятий. 3. Ученик ежедневно записывает домашнее задание в графы того дня, на
который они заданы: в период школьных каникул – план внеклассных и
внешкольных мероприятий. 4. Учащиеся предъявляют дневник по требованию учителей и классного
руководителя. 5. Учитель, оценивая ответ учащегося, выставляет оценку в классный
журнал, одновременно вписывает ее в дневник и заверяет своей подписью.
6. Классный руководитель следит за наличием в дневнике всех оценок,
полученных учащимися в течение недели, отмечает количество
пропущенных уроков за неделю. В конце дневника выставляет итоговые
сведения об успеваемости, поведении учащегося. 7. Выставление оценок за общественно полезный, производительный труд в
течение недели, а так же записи о выполненной учеником работе в период
трудовой практики производят лица, ответственные за организацию
этих работ. 8. Для заметок учителей и классного руководителя выделена специальная
страница в конце дневника. 9. Родители еженедельно просматривают и подписывают дневники. 10. Администрация школы осуществляет систематический контроль за
состоянием ведения дневника учащихся III – ХI классов.
IV. Выбор ответственного ученика за проверку готовности дневников к
учебному дню. (Ребята сами определяют, кто мог бы проверять наличие и
готовность дневников к работе на уроке.)
V. Проведение консультации для тех ребят, кого избрали ответственным за
проверку ведения дневника. Учитель обучает ребят тому, как нужно себя
вести, если ученик не хочет показывать свой дневник, как попросить показать
дневник, на что обращать внимание при проверке.
Такая консультация обязательна, так как она позволяет предупредить
конфликтные ситуации, которые могут возникнуть у учащихся.
VI. Подведения итогов.
А сейчас я подарю каждому ученику картинку-наклейку с пожеланием удачи
в ведении школьного дневника и объявляю конкурс на самое большое
количество пятерок в школьном дневнике, результаты которого будут
проводить жюри из состава учащихся класса и родительского комитета.
Урок математики
2 класс
Тема: Сутки. Час. Минута. Секунда. Определение времени по часам. Вычисление выражений на действия разных ступеней. Таблица умножения числа 6.
Цель: ознакомить учащихся с единицами измерения времени – часом, минутой, секундой; дать понятие суток, научить детей определять время по часам и решать задачи, связанные с измерением времени; совершенствовать вычислительные навыки и знания таблицы умножения числа 6; развивать мышление; воспитывать аккуратность письма.
Оборудавание: модель часов, карточки таблицы умножения числа 6, наочность, учебник.
Тип урока: урок усвоения новых знаний, умений и навыков.
Литература: Навчальна програма для загальноосвітніх навчальних закладів 1-4 класу ( з навчанням російською мовою, Освіта 2011 рік) з урахуванням змін та доповнень; Методичні рекомендації з педагогічної практики для студентів денної і заочної форм навчання напряму підготовки «Початкова освіта»/За заг. ред. О.А. Павлик. –Кривий Ріг: КПІ, 2013; Богданович М. В. Методика викладання математики в початкових кла- сах : навчальний посібник / М. В. Богданович, М. В. Ко- зак, Я. А. Король. — 4-те вид., переробл. і доп. — Терно- піль : Навчальна книга – Богдан, 2014. — 360 с; Стойлова Л.П., Пышкало А. М. « Основы начального курса математики : Учеб. Пос для учашихся пед. уч. По спец. № 2001 «Преподавание в нач. классах общеобразоват. шк» – М.: Просвещение, 1988 – 320с.: ил.
Ход урока
I. Организация класса.
– Проверьте, все ли у вас готово к началу урока.
II. Мотивация учебной деятельности.
1 Учитель:
Начинается урок,
Он пойдёт ребятам впрок.
Постарайтесь всё понять
И внимательно считать.
2 . Сообщение темы урока.
— Дети, сегодня на уроке вы постараетесь научиться понимать и определять время. Также мы с вами продолжим работу над выражениями, проверим ваши знания таблицы умножения числа 6.
III. Актуализация опорных знаний.
– Ребята, сейчас мы прослушаем и повторим таблицу умножения числа 6
( аудиозапись)
Каллиграфическая минутка. Запись чисел 6- го десятка (61.62.63…70)
6 увеличить в 7 раз 6 * 7 = 42
6 увеличить в 4 раз 6 *4 =24
От 36 отнять 20 36-20= 16
2 увеличить в 6 раз 2 * 6 = 12
4 увеличить в 5 раз и уменьшить в 5 раз 4 * 5 : 5 = 4
6 увеличить в 8 раз 6 * 8 = 48
6 увеличить в 5 раз 6*5 = 30
3 увеличить в 6 раз 3* 6 = 18
К 45 прибавить 15 и отнять 9 45 + 15 – 9= 51
6 увеличить в 6 раз 6 * 6 = 36
6 увеличить в 9 раз 6 * 9 = 54
Проверка м. д. 42, 24, 16, 12, 4, 48, 30, 18, 51, 36, 54.
IV. Восприятие и осознание нового материала
1 . Беседа о значении времени в жизни людей
— Время, это удивительный измеритель жизни на земле. Секунды складываются в минуты, минуты в часы и так далее. По времени мы определяем когда нужно вставать, ложится, отправляться в школу или на работу.
2 . Объяснение учителя с элементами беседы.
— Сутки промежуток времени, за который Земля вращается вокруг своей оси. В сутках – 24 часа. В 1 часе 60 минут. В 1 минуте 60 секунд. За сутки часовая стрелка делает два полных оборота. Минутная стрелка делает полный оборот за 1 час, а секундная – за 1 минуту.
1 сутки = 24 ч
1 ч = 60 мин
1 мин = 60 с
3. мультфильм о времени.
4 . Работа у доски ( макет часов)
— Ребята давайте попробуем определить время.
10 часов 45 минут
3 часа 25 минут
Без десяти пять
4 часа 30 минут
11 часов 15 минут
Половина девятого
Без четверти три
Четверть восьмого
Двенадцать часов дня, 24 часа ночи.
4. Работа с учебником с. 111 № 732
— Запишите, который час показывают каждые часы и который час покажут каждые часы через 10 мин.
5. Физкультминутка
V . Обобщение и систематизация знаний, умений и навыков
1 . Работа с учебником с. 111 № 734
75 – 5 * 8 = 75 – 40 =35
32 – 7 + 8 = 25+ 8= 33
(60 – 40) : 4 = 20 : 4 = 5
44 – ( 7 + 17 ) = 44 – 24 = 68
6 * 7 – 42 = 42 -42 = 0
18 : ( 12 – 9 ) = 18 : 3 = 6
2. Работа с учебником с 111 задача № 735
– Чтение задачи учеником
– усвоение краткой записи задачи
Каким было первое число (3)
Что известно о втором числе (оно в 6 раз больше)
Известно ли на третье число? (нет)
А что о нем мы знаем? (третье число в 2 раза меньше второго)
– План решения задачи
1.Каким было второе число.
2. Какое третье число.
– Решение задачи
1. Какое действие нужно выполнить, что бы узнать второе число?
3 * 6 = 18 (потому, что в 6 раз больше)
2. Как мы сможем узнать третье число?
18 : 2 = 9 ( : потому, что в 2 раза меньше)
Выражение 3 * 6 : 2 = 9
Ответ: 1 число -3
2 число -18
3 число – 9
3. Работа с учебником с. 112 № 739 ( самостоятельно с комментированием)
5 * 5 + 5 = 5 * 6 30=30
5 * 9 – 5 = 5 * 8 40=40
5 * 6 + 5 + 5 = 5 * 8 40=40
5 * 8 – 5 – 5 = 5 * 6 30=30
VI. Домашнее задание 738
V. Итог урока
– что такое циферблат?
– сколько часов имеют сутки?
– сколько минут в одном часе?
– сколько секунд в минуте?
-как называется большая стрелка? Почему? (минутная , за 60 мин или 1 час один оборот)
-Как называется маленькая стрелка? Почему?(часовая, за 12 часов один оборот)
– почему нужно беречь время?
6 х 1 = 6
6 х 2 = 1 2
6 х 3 = 1 8
6 х 4 = 2 4
6 х 5 = 3 0
6 х 6 = 3 6
6 х 7 = 4 2
6 х 8 = 4 8
6 х 9 = 5 4
6 х 1 0 = 6 0
Основной этап экзаменов для поступающих в 7 и 8 классы пройдет 12-13 марта 2022 года. В эти дни абитуриенты будут сдавать все требуемые экзамены (русский и английский языки, математика, комплексный экзамен).
Поступающие в 9 класс 13 марта 2022 года будут сдавать профильный экзамен. В случае успешной сдачи экзамена, абитуриенты будут приглашены на обязательные экзамены (русский и английский языки, математика), которые пройдут 26-27 марта.
Абитуриент может выбрать один из двух форматов участия:
Мы ожидаем, что на кампусе школы будут сдавать очные экзамены абитуриенты из Москвы и Подмосковья, однако оставляем это на усмотрение абитуриентов и их семей.
Важно! Кампус школы может вместить строго определенное количество человек, поэтому для того, чтобы сдавать экзамены здесь, необходимо будет зарегистрироваться (форма регистрации появится позже). Если места для сдачи экзаменов на кампусе закончатся и вы не сможете зарегистрироваться – не расстраивайтесь и готовьтесь к сдаче экзамена онлайн.
Список экзаменов:В комплексном экзамене собраны задания из разных предметных областей: естествознания, социально-гуманитарных наук, информатики, лингвистики. Во время экзамена абитуриент может решать задачи как из одного предметного блока, так и выбрать задачи из разных блоков. На результат влияет не количество выбранных блоков, а качество выполнения заданий.
В зависимости от достижений, указанных в заявке на поступление, абитуриент может быть освобожден от участия в основном экзамене по одному или нескольким предметам. Достижения каждого абитуриента рассматриваются индивидуально, результаты рассмотрения будут указаны в письме, которое мы направим на адрес электронной почты, указанный при регистрации.
Всем добра! История такая: знакомая посетовала, что с учителем назревает конфликт. Мальчику 7 лет будет на днях, и он должен был перейти в подготовительную группу. Но случился развод родителей, переезд, а на новом месте в сад не взяли, переполненные группы, назначили комиссию, которая показала, что мальчик к школе готов. При этом невролог поставил гиперактивность.
И вот на данном этапе ребенок вообще не умеет читать, когда все в классе пришли после курсов подготовки читающими, пишущими , считающими, кто лучше, кто хуже. Сын знакомой сразу попал в отстающие, он же на подготовку не ходил, и дома об этом не думали заранее. Учитель часто подначивает, мол, в садик надо обратно, уже и дети стали посмеиваться. Я не хочу обсуждать профессионализм учителя, но понятно, что такой ребенок тормозит весь класс, и он ей поперек горла. Позаниматься с ним дополнительно она отказалась, у нее еще предметы в старших классах, некогда. Советует учить самим, нанимать репетитора, а финансово туго там сейчас, муж не помогает, алименты еще не оформили, все в процессе только.
Дома пытаются помочь, конечно, но срываются на психи, когда ребенок не может сообразить. Своих детей труднее учить. В общем, воз и ныне там.
Я предложила свою помощь, по образованию учитель нач. классов, а сейчас все мои кружки закрыты, я свободна, как ветер в поле.
И вот вчера они пришли, принесли по моей просьбе его рабочие тетради. Я была в великом удивлении! Ребенок уникальный просто! Он очень красиво, аккуратно и правильно переписывает целые тексты в прописях и тетрадях в косую линейку. Многие первоклашки, и не только, о таком почерке и мечтать не смеют. Образцово копирует. НО! Совершенно не понимает, что пишет, т.к. читать не умеет, и буквы не все знает. Показываю им же написанную букву Б, а он говорит, что это М. Т.е. он филигранно копирует совершенно непонятные ему узоры. Циферки понимает, они просто прелесть у него, с математикой более менее на уровне.
Неусидчивый, отвлекается часто, но если рядом с ним сидеть, то старается. Часто называет себя дураком. Я его протестировала на предмет самооценки, не все так плохо, адекватная вполне. Поставили с ним цель – научиться читать за эти 10 дней, мама сказала, что верит в него.
Вчера на первом занятии вообще никак не мог сложить согласный звук с гласным. И “пели” буквы вместе, и машинки (согласные) заезжали в гаражи (гласные), ну никак. А сегодня щелкнуло! Все чаще стал прочитывать простые слоги и слова. Прописали несколько букв и слогов с пониманием написанного. Короче, явный прогресс, появилась надежда, что все получится. Поставила ему “отлично” и отпустила играть со своими, они еще вчера сразу нашли общий язык.
А у меня, прям, спортивный интерес развился, чем же все кончится, а то уже ярлык навесили, можно сказать.
В испытатели отбирают наиболее квалифицированных и перспективных военных летчиков, да к тому же молодых – до 32 лет. Чтобы попасть в воздушную элиту, им предстоит сдать не один экзамен и многому научиться. Ну и, конечно, очень много летать.
Центру подготовки летчиков-испытателей Минобороны РФ исполняется 50 лет. В преддверии юбилея начальник центра генерал-майор Радик Бариев рассказал “Красной звезде” о том, как отбирают и готовят элитных пилотов для военной авиации.
– В испытательный центр принимаются летчики и штурманы ВС РФ, проходящие службу по контракту, с высшим профессиональным военным образованием и полной военно-специальной подготовкой. Кандидаты рассматриваются не старше 32 лет (с квалификацией летчика первого класса) или 30 лет (второй класс), с налетом не менее 500 часов, годные по состоянию здоровья, успешно прошедшие курсы повышения квалификации в Государственном летно-испытательном центре МО и подходящие еще по ряду критериев, – рассказал генерал.
Кандидаты сдают экзамены по одному из трех направлений: самолетное, вертолетное, штурманское. Для оценки уровня летной подготовки проводятся полеты под руководством самых опытных летчиков и штурманов ГЛИЦ. Слушателю необходимо выполнить несколько полетов на освоенном типе летательных аппаратов и полет на неосвоенном – для проверки адаптации к новым воздушным судам.
– Чтобы устранить субъективный фактор, полеты проводятся с разными инструкторами, – отметил Бариев. Экспертный метод вообще положен в основу подготовки пилотов: качества будущих испытателей всесторонне оцениваются опытными специалистами центра.
Обучение длится полтора года – плюс двухмесячный отпуск по его завершению. За полувековую историю существования центра 44 его выпускника стали Героями Советского Союза и России, более 70 удостоены званий “Заслуженный летчик и штурман-испытатель”, девять человек участвовали в космических программах.
Зимой 2016 года в «Спартак» из Перми приехали сразу два футболиста с русским паспортом. Георгия Джикия в Тарасовке защитили от чар «Локомотива» (комментатор Дмитрий Шнякин твитил про симпатии Семина), а Александра Селихова отбили у «Зенита».
Карьеры обоих бриллиантов «Амкара» сложились по-разному. Джикия сразу встал в старт, дорос до сборной и капитанской повязки. Селихов же оказался в раме после спада Артема Реброва. Он провел постчемпионский сезон в основе и прыгал за мячами с «Севильей» и на «Энфилде» с «Ливерпулем» в Лиге чемпионов. Казалось, что красно-белые приобрели молодого голкипера на годы – с 1994 г.р. в паспорте можно делать сэйвы еще минимум 10 следующих сезонов.
Но весной 2018-го у Александра начались проблемы. Сначала пресс-служба писала про микротравму мышц бедра, но перед чемпионатом мира оказалось, что вратарь на тренировке повредил ахилл. «Сначала Селихов был в расширенном списке, – объяснял главный тренер сборной Станислав Черчесов. За час-полтора до того, как мы уже окончательную заявочку подавали, поступил звонок из «Спартака» Безуглову. Он перезвонил и сказал, что с Селиховым случилось несчастье: порвал ахилл. Так что мы [Селихова из заявки] исключили».
Чемпионат России
Максименко – худший вратарь РПЛ по отраженным ударам
25/10/2021 В 11:10
Александр Селихов
Фото: Getty Images
Вместо него в ворота поставили 20-летнего Александра Максименко, который смотрелся не так кошмарно на фоне жутких сезонов «Спартака» позднего Карреры и любого Кононова. Олег вернул восстановившегося Селихова только зимой 2019-го. Александр снова оказался в раме на великом «Кубке Париматч Премьер» и косвенно принес красно-белым новый трофей, пусть и в товарищеском турнире в Катаре.
Селихов провел шесть матчей в весенней части сезона-2018/19, пропускал почти в каждой игре и ушел с поля только из-за травмы. Посмотрите хайлайты апрельского дерби с ЦСКА – армейцы засунули два мяча в сетку «Спартака», но голкипера вряд ли можно обвинить хотя бы в одном из них. Уже при прыжке за ударом Влашича сразу после второго гола заметно, что Саша схватился за перчатку и что-то показал тренерскому штабу (на видео – на отметке 5:34). Через минуту он потопает к технической зоне, уступит место Максименко и скроется в подтрибунном помещении.
Рентген показал, что у Селихова перелом фаланги пальца, и нужно вставлять фиксирующую пластину. Но как только вратарь восстановился, как тут же снова слег на шесть месяцев с порванным ахиллом. Алекс вернулся в ворота только в октябре 2020-го (впервые за 1,5 года) и выходил на поле только за «Спартак-2» в ФНЛ.
В январе 2021-го Саша понял, что с Максименко в основе и Ребровым на скамейке место в раме ему не светит, и публично психанул: «Если до мая ничего не изменится, я покину «Спартак». Очень много времени потерял, хочу играть. На поле получаю самые лучшие эмоции» (цитата по «Спорт-Экспрессу»). Ему повезло, что в дерби с ЦСКА Макси получил лишнюю карточку и дал шанс конкурентам. Но с «Арсеналом» в Туле Селихов не показал класс – вроде бы уверенно играл на выходах, пропустил только от своего, но не впечатлил экспертов. После дисквала Максименко вернулся в стартовый состав, а Селихов опять телепортировался на банку.
Через три недели после игры с «Арсеналом» «СЭ» опубликовал инсайд о возможном уходе Александра в «Рубин», но пресс-атташе красно-белых только качал головой: из Казани интереса не было, в клуб никто не обращался. Из самого горячего вратаря лиги Селихов превратился в баночника, который нужен только для разминки Максименко перед играми.
Но старт чемпионата выдался для основного голкипера «Спартака» ужасным – на «Открытие Банк Арене» видели в Макси нового Акинфеева. Но не уверенного в себе брутала, а человека, который лишний раз не прыгнет за безнадежным мячом. После 1:7 от «Зенита» Руй Витория наконец-то усадил Максименко на банку и поднял в основу с «Ростовом» бэкапа.
Селихов снова не добавил красно-белым надежности. Еще в первом тайме он неловко подставлял руки под несложные удары и навесы, на 75-й минуте случайно отразил выход один на один Полоза, а на финише матча слишком далеко вышел из ворот и вытащил закидушку Глебова уже из сетки.
Интересно, что Александр пропустил в пятом подряд матче за главную команду «Спартака», причем получал и от грандов («Зенит» и ЦСКА), и от середняков («Ахмат» и «Ростов»). Еще летом фанатам красно-белых казалось, что в раздевалке за одно место в воротах бьются три волка – надежный Максименко, голодный Селихов и опытный Ребров. Но в решающие моменты сезона выясняется, что оба голкипера не выручают и ошибаются в простых ситуациях.
При существующем лимите, когда в раме обязательно нужно ставить русского, у «Спартака» нет других вариантов – или искать кого-то на рынке, или размораживать 37-летнего Реброва. Пока непонятно, в чем причина спада Селихова – травмы, потеря уверенности или растренированность из-за долгого перерыва. Но вряд ли он вернется на уровень, на котором громил «Севилью» и останавливался в шаге от домашнего чемпионата мира.
Следи за новостями футбола на Eurosport.ruЧемпионат России
Селихов сломал палец руки. У него 6 матчей за 2 года
15/07/2021 В 16:03
Чемпионат России
«Наши лучше – но где они?» Зарема – о русских игроках «Спартака»
05/06/2021 В 14:26
Лена Н.
задано • 29.06.15 Культура клеток содержит 9 тысяч клеток и растет со скоростью r (t) = 6e0,17t тысяч клеток в час.Найдите общее количество клеток через 5 часов. Ответьте с точностью как минимум до 2 знаков после запятой.
Марк М. ответил • 29.06.15
Учитель математики – Высшая квалификация NCLB
r (t) = 6e 0,17t
r (5) = 6e ( 0,17) (5)
г (5) = 6e 0,85
г (5) ≈ 6 (2.33964685)
т (5) ≈ 14.03788113
14037,88 вырастет за 5 часов. Добавляя исходные 9000, получается 23037.88.
Формула экспоненциального роста обычно содержит начальную сумму. Правильно ли было написано?
Выберите эксперта и познакомьтесь онлайн. Никаких пакетов или подписок, платите только за необходимое время.
Лучший способ добавить время – использовать кнопку AutoSum на вкладке HOME . Вы также можете добавить единицу времени, например 1,5 часа, к времени суток, например 10:00 утра, с помощью функции ВРЕМЯ .
Добавить время
Предположим, вы хотите знать, сколько часов и минут потребуется для выполнения двух задач. По вашим оценкам, первая задача займет 6 часов 45 минут, а вторая – 9 часов 30 минут.
В ячейке B2 введите 6:45 , а в ячейке B3 введите 9:30 .
Введите = B2 + B3 в ячейку B4 и нажмите Enter.
На выполнение двух задач потребуется 16 часов 15 минут.
Вы также можете складывать времена, используя AutoSum для суммирования чисел.
Щелкните ячейку B4. Затем на вкладке HOME щелкните AutoSum . Формула будет выглядеть так: = СУММ (B2: B3) .Нажмите Enter, чтобы получить результат, 16 часов 15 минут.
Добавить или вычесть время
Создание или удаление произвольного числового формата
Функция ВРЕМЯ
В Excel можно добавлять время так же, как и другие типы чисел.
Например, вы можете сделать это, если хотите узнать, сколько времени потребовалось для выполнения задач проекта.
Лучший способ сделать это – использовать кнопку AutoSum на вкладке HOME .
Я щелкаю по нему один раз, чтобы посмотреть, что он собирается добавить.
Это то, что я хочу, поэтому я щелкаю по нему еще раз и получаю общее время выполнения задач.
Вы можете снова использовать AutoSum , чтобы добавить задачи этого столбца, или формулу для добавления этих двух ячеек.
Чтобы начать формулу, всегда используйте знак =, щелкните ячейку D2, введите знак +, щелкните ячейку D3 и нажмите Enter.
12 часов 45 минут плюс 15 часов 30 минут, это не 4 часа 15 минут.
Я знаю, что формула верна, поэтому, должно быть, она настроена для отображения времени в ячейке D4.
В этом примере общая сумма превышает 24 часа.
Excel может отображать время разными способами, например, часы и минуты или часы, минуты и секунды; а.м., после полудня, или в 24-часовом формате; или число больше 24 часов, как требуется в этом примере.
Чтобы отформатировать ячейку, щелкните ее правой кнопкой мыши и выберите Форматировать ячейки .
В категории Категория щелкните Custom . В поле Тип введите левую квадратную скобку, h, правую квадратную скобку, двоеточие и затем мм.
Квадратные скобки указывают Excel на превышение 24 часов.
H означает часы, а мм – минуты.
См. Краткое содержание курса в конце этого курса для получения дополнительной информации о форматировании времени. И теперь мы просто нажимаем OK , и общее время отображается правильно.
Вы можете использовать квадратные скобки, даже если время не превышает 24 часов.
Если вы не уверены, превысит ли общее количество часов 24 часа, лучше использовать их.
Вы также можете добавить единицу времени, например, полтора часа, к времени дня, например 10:00 a.м., используя функцию ВРЕМЯ .
Введите знак =, затем щелкните A7 (который содержит время дня, 10:00 утра), затем введите знак +, ВРЕМЯ , левая скобка, 1 (количество часов, которое мы хотим добавить), запятая, 30 (для минут, которые мы хотим добавить), 0 (для секунд), закрывающая скобка и нажмите Enter. И у нас есть расчетное время 11:30
Далее, Время вычитания .
Следуйте пошаговым инструкциям по созданию образца формулы со ссылками и функциями.
Что нового в Excel 2013
Основные задачи в Excel
Я собираюсь показать вам, как написать базовую формулу, чтобы продемонстрировать несколько важных концепций.
Во-первых, чтобы все упростить, давайте щелкнем этот знак +, чтобы добавить новый рабочий лист. Затем дважды щелкните вкладки рабочего листа и введите имена.
Теперь мы можем добавить данные.
Формула, которую мы собираемся написать, будет помещена в этот столбец и будет использовать суммы в этих двух столбцах и процентную сумму.
Мы могли бы отформатировать данные в виде таблицы, но оставим все как есть для этой демонстрации.
Первое, что нам нужно, это ячейка для хранения процентной суммы.
Выберите ячейку за пределами данных и введите .1.
Затем перейдите к группе Number и нажмите кнопку % , чтобы отформатировать ячейку в процентах.
Когда мы закончим, мы сможем изменить это число, если мы хотим вычислить другую сумму буфера затрат с помощью нашей формулы.
Теперь мы можем ввести формулу.
Формула складывает ячейки “Материал” и “Трудозатраты”, а затем умножает это количество на ячейку с процентом буфера.
Звездочка используется для умножения. Нажмите Enter, чтобы увидеть, что произойдет.
Что ж, совершенно очевидно, что эта сумма не составляет 10 процентов от первых двух столбцов. Причина этого в том, что я не учел порядок расчетов.
Это порядок, в котором Excel вычисляет части формулы.
Не нужно запоминать все детали.
Просто имейте в виду, что умножение и деление вычисляются до сложения и вычитания. И в нашей формуле мы хотели, чтобы Excel складывал первые ячейки, а затем умножал их.
Чтобы сообщить Excel, что нужно добавить первым, мы просто вставляем круглые скобки. Теперь вместо умножения и сложения Excel сложит первые два числа, а затем умножит их.
Теперь мы можем использовать AutoFill для добавления формул в другие ячейки.
Но теперь мы сталкиваемся с другой проблемой.
В первой ячейке формула получает процент буфера от D20.
Но в следующей ячейке формула относится к D21. А поскольку D21 пуст, формула умножается на ноль и возвращает нулевое значение.
Но почему Excel изменил эту ссылку на ячейку на D21?
Потому что, когда вы используете AutoFill или копируете формулу, Excel по умолчанию использует относительные ссылки.Вот как это работает.
В первой ячейке формула ссылается на эти ячейки в строке 6 и D20. При использовании Автозаполнение Excel изменяет ссылку на ячейку в зависимости от местоположения на строку 7 и D21.
В большинстве случаев это то, что вам нужно.
Но в этом случае мы хотим, чтобы формулы всегда использовали значение в этой конкретной ячейке. Чтобы это произошло, нам нужно изменить ссылку на ячейку на абсолютную ссылку.
В формуле щелкните D20, а затем введите знаки доллара перед буквами D и 20.
Знаки доллара говорят Excel, что формула всегда должна ссылаться на ячейку в столбце D в 20-й строке. Нажмите Ввод.
Теперь, когда вы Автозаполнение ячейки, все формулы указывают на D20. И мы можем изменить процент, чтобы рассчитать другой размер буфера.
Последнее, что мы сделаем, – это добавим столбец «Расчетная стоимость», в котором используется функция.
Выбрав G6, щелкните Автосумма .
Excel автоматически предполагает, что мы хотим добавить 3 столбца слева.
Итак, жмем Enter. А затем Автозаполнение формулы в другие ячейки.
В этом курсе вы изучили основы создания своей первой книги Excel.
Куда вы пойдете дальше? Что ж, попробуйте самостоятельно изучить Excel 2013.Например, вы можете быстро создавать диаграммы и использовать эти кнопки для добавления форматирования.
Чтобы еще глубже изучить возможности, инструменты, функции и формулы Excel, воспользуйтесь ссылками в кратком изложении курса.
ДЕЛЕНИЕ КЛЕТОКРАЗДЕЛЕНИЕ КЛЕТОК ПРИ НАЛИЧИИ ФАКТОРА РОСТА
Введение: В оптимальных условиях рост клеток происходит по мере того, как каждая клетка завершает клеточный цикл и удваивается, образуя две дочерние клетки, которые позже сами делятся.Факторы роста могут спровоцировать рост ячеек. Например, интерлейкины производятся лейкоцитами для стимуляции роста других клеток иммунной системы. Эритропоэтин вырабатывается почками, чтобы способствовать росту красных кровяных телец.
Важность: мы можем использовать уравнения, чтобы определить, как фактор роста влияет на скорость роста клеток.
Вопрос: Как факторы роста влияют на скорость роста популяций клеток?
Переменные:
N т | количество клеток в популяции |
N 0 | количество ячеек изначально |
ф | частота циклов ячеек в единицу времени (1 / час) |
т | время (час) |
f макс | максимальная частота клеточного цикла (1 / час) |
с | константа (час x мг / мл) |
[G] | концентрация фактора роста (мг / мл) |
Методы: Рост клеток часто описывают экспоненциально (одна клетка становится двумя клетками, четырьмя клетками становится восемью клетками. ..). Математически это можно описать следующим уравнением:
где N t – количество ячеек в момент времени t, N 0 – количество ячеек изначально, а f – частота циклов ячеек в единицу времени. Например, если клетка завершает клеточный цикл два раза в час, тогда f = 2 клеточных цикла в час. Точно так же мы можем записать продолжительность клеточного цикла как 1 / f или количество часов на клетку. цикл. Если f = 2, то продолжительность клеточного цикла составляет 1/2 часа.
В присутствии фактора роста частота клеточных циклов может увеличиваться. Однако, поскольку рецепторы фактора роста в клеточной мембране могут насыщаться при высоких концентрациях фактора роста, скорость роста клеток не может увеличиваться бесконечно.
Мы можем использовать уравнения Михаэлиса-Ментен и Лайнуивера-Берка для описания продолжительности клеточного цикла (1 / f) как функции концентрации питательной среды [G], используя следующее уравнение:
, где f max – максимальная частота деления клеток, когда [G] очень велико, а c – константа, относящаяся к интенсивности, с которой фактор роста увеличивает деление клеток. Мы можем построить график 1 / f как функцию [G], чтобы проверить, как Концентрация фактора роста влияет на продолжительность клеточного цикла. Возьмем c = 0,1 часа. (мг / мл) и f макс = 5 клеточных циклов / час.
Интерпретация: Даже при относительно низких концентрациях фактора роста продолжительность клеточного цикла может быстро уменьшаться. Это приводит к более высокой частоте делений клеток в единицу времени. Поскольку концентрация фактора роста Однако увеличивается, продолжительность клеточного цикла в конечном итоге выравнивается, и частота клеточных делений не может увеличиваться дальше.
Выводы: Наличие фактора роста может значительно увеличить скорость роста популяции клеток. Количественно оценив это с помощью простых уравнений, мы можем экспериментально определить максимальную частоту деления клеток для популяции. а также скорость, с которой фактор роста помогает клеткам достичь этой максимальной частоты.
Дополнительные вопросы:
1. Посмотрите на уравнение для 1 / f. Какова продолжительность ячейки, когда [G] стремится к бесконечности?
2.График f как функция от [G]. Как интерпретация этого графика соотносится с интерпретацией функции 1 / f? На какие другие биологические процессы похожа эта функция?
3. Как изменяется экспоненциальный рост населения (функция Nt) при увеличении концентрации фактора роста [G]? График N t как функция времени для нескольких значений f.
Источник: Chen, C. and S.C. Chen. 1981. Активность фактора роста клеток: новый количественный метод анализа культур клеток.Экспериментальные исследования клеток 136 : 43-51
Copyright 1999 М. Билс, Л. Гросс, С. Харрелл
/ ru / excelformulas / about-this-tutorial / content /
Одна из самых мощных функций Excel – это возможность вычислять числовой информации с использованием формул . ) для экспонент.
Стандартные операторыВсе формулы в Excel должны начинаться со знака равно ( = ). Это связано с тем, что ячейка содержит формулу и вычисляемое значение или равна им.
Хотя вы можете создавать простые формулы в Excel вручную (например, = 2 + 2 или = 5 * 5 ), большую часть времени вы будете использовать адреса ячеек для создания формулы. Это известно как создание ссылки на ячейку .Использование ссылок на ячейки гарантирует, что ваши формулы всегда будут точными, потому что вы можете изменить значение ссылочных ячеек без необходимости переписывать формулу.
Использование ссылок на ячейки для пересчета формулыКомбинируя математический оператор со ссылками на ячейки, вы можете создавать множество простых формул в Excel. Формулы также могут включать комбинацию ссылок на ячейки и чисел, как в примерах ниже:
Примеры простых формулВ нашем примере ниже мы будем использовать простую формулу и ссылки на ячейки для расчета бюджета.
Ввод знака =
Если результат формулы слишком велик для отображения в ячейке, он может отображаться в виде знаков фунта (#######) вместо значения. Это означает, что ширина столбца недостаточна для отображения содержимого ячейки. Просто увеличьте ширину столбца , чтобы отобразить содержимое ячейки.
Истинное преимущество ссылок на ячейки состоит в том, что они позволяют обновлять данные на листе без необходимости переписывать формулы.В приведенном ниже примере мы изменили значение ячейки B1 с 1200 до 1800 долларов. Формула в B3 автоматически пересчитает и отобразит новое значение в ячейке B3.
Пересчитанное значение ячейкиExcel не всегда сообщит вам , если ваша формула содержит ошибку, поэтому вам нужно проверить все свои формулы. Чтобы узнать, как это сделать, вы можете прочитать урок «Двойная проверка формул» в нашем руководстве по формулам Excel.
Вместо того, чтобы вводить адреса ячеек вручную, вы можете указать и щелкнуть на ячейках, которые хотите включить в формулу.Этот метод позволяет сэкономить много времени и усилий при создании формул. В нашем примере ниже мы создадим формулу для расчета стоимости заказа нескольких коробок с серебряным пластиком.
Формулы также можно скопировать в соседние ячейки с заливкой дескриптором , который может сэкономьте много времени и усилий, если вам нужно выполнить один и тот же расчет несколько раз на листе. Просмотрите наш урок об относительных и абсолютных ссылках на ячейки, чтобы узнать больше.
Копирование формулы в соседние ячейки с помощью маркера заполненияИногда может потребоваться изменить существующую формулу. В приведенном ниже примере мы ввели неправильный адрес ячейки в формулу, поэтому нам нужно исправить его.
Если вы передумаете, вы можете нажать клавишу Esc на клавиатуре, чтобы избежать случайного изменения формулы.
Чтобы отобразить все формулы в электронной таблице, вы можете удерживать клавишу Ctrl и нажать ` (серьезный ударение). Клавиша с надстрочным ударением обычно расположена в верхнем левом углу клавиатуры. Вы можете снова нажать Ctrl + `, чтобы вернуться к нормальному виду.
/ ru / excelformulas / комплексные-формулы / содержание /
Субпопуляции клеточных суспензий могут быть физически разделены с помощью сортировщиков клеток FACS Aria II и FACS Aria Fusion на различные сортировочные рецепторы для клонирования или групповой сортировки. Оба сортировщика клеток могут помещать по одной клетке в каждую лунку 6, 24, 48, 96 или 384-луночного планшета с целью клонирования. Сортировщики клеток также могут сортировать любое количество клеток в каждую лунку 6, 24, 48, 96 или 384-луночного планшета, 1,5 мл пробирки Эппондорфа, 12 x 75 мм пробирки или 15 мл центрифужные пробирки с целью массовая сортировка.При сортировке на 6, 24, 48, 96 или 384-луночные планшеты только одна субпопуляция может быть отсортирована на лунку за раз, в то время как до четырех популяций могут быть отсортированы одновременно для групповой сортировки. (подробные сведения о сортировочных емкостях см. в последующем разделе на этой странице)
Политика сортировки живых клеток человека, инфекционных агентов, клеток, инфицированных вирусом, неспособным к репликации, или клеток животных, ранее подвергшихся воздействию инфекционного агента
Суспензии клеток могут быть помещены в 1. Криопробирки 0–2,0 мл, пробирки 12 x 75 мм или центрифужные пробирки 15 мл для использования с FACS Aria II или FACS Aria Fusion. Биологически опасные Образцы следует помещать в пробирки с крышками.
Конечная концентрация клеток для сортировки клеток должна составлять от 5 x 10 6 до 30 x 10 6 клеток на мл в зависимости от того, являются ли клетки покоящимися лимфоцитами, активированными лимфоцитами, клеточными линиями, дезагрегированной твердой тканью или фибробластами.Список основных типов ячеек и связанных с ними размеров сопел можно увидеть в системе онлайн-бронирования по ссылке «Типы ячеек Aria / Fusion».
Тип ячейки | Концентрация клеток | Размер сопла / давление в оболочке | ячеек / час |
---|---|---|---|
Лимфоциты покоя | 20-30 x 10 6 / мл | 70 мкм / 70 фунтов на кв. 6 / час | |
Фибробласты | 5 x 10 6 / мл | 130 мкм / 10 фунтов на кв. Дюйм | 7.6 / час |
Тип ячейки | Концентрация клеток | Размер сопла / давление в оболочке | Макс.скорость |
---|---|---|---|
Лимфоциты покоя | 20-30 x 10 6 / мл | 70 мкм / 70 фунтов на кв. Дюйм | 22000 / сек |
Активированные лимфоциты | 10-20 x 10 6 / мл | 85 мкм / 45 фунтов на кв. Дюйм | 11000 / сек |
Сотовые линии | 5-10 x 10 6 / мл | 100 мкм / 20 фунтов на кв. Дюйм | 9000 / сек |
Твердая дезагрегированная ткань | 5-10 x 10 6 / мл | 100 мкм / 20 фунтов на кв. Дюйм | 9000 / сек |
Фибробласты | 5 x 10 6 / мл | 130 мкм / 10 фунтов на кв. Дюйм | 2,500 / сек |
Непосредственно перед сортировкой клетки должны быть отфильтрованы через нейлоновую сетку.Рекомендуются сетчатые фильтры 70 мкм (Falcon 2350), которые можно приобрести в магазинах Biochem. Фильтрация ячеек значительно снижает вероятность засорения прибора во время сортировки. Как правило, мы не сортируем нефильтрованные образцы. Мы хотим обеспечить успешную сортировку, и после подключения прибора может потребоваться значительное время, чтобы вернуть прибор к его исходной конфигурации. Время, затраченное на отключение насадки и возвращение прибора в состояние сортировки, может занять ваше запланированное время.Если препарат клеток имеет тенденцию к повторному слипанию после фильтрации, то добавление ДНКазы или других агентов к образцу может помочь устранить агрегацию. См. Раздел «Разбивка слипшихся ячеек» для получения дополнительной информации.
Повышение жизнеспособности клеток после сортировки может быть достигнуто путем поддержания постоянного pH среды для сбора сортировки и обеспечения источника белка для отсортированных клеток. Нормальные среды для культивирования клеток используют буферную систему CO 2 , обычно поставляемую в инкубатор.Воздействие на эту среду воздуха во время сортировки клеток позволяет изменять pH. Поэтому рекомендуется, чтобы культуральная среда, забуференная PBS или Hepes, была помещена в сосуды для сортировки с добавлением достаточного количества сыворотки для воспроизведения условий культивирования. Конечный объем жидкости в сосуде для сбора сортировки будет представлять собой смесь среды для сбора и жидкости оболочки сортировщика клеток, отложившейся в результате сортировки. Количество сыворотки должно отражать окончательный ожидаемый объем.
FACS Aria II и FACS Fusion могут сортировать по 1 мл микропробиркам, 1. Пробирки Эппендорфа 5 мл, пробирки 12 x 75 мм, конические центрифужные пробирки 15 мл, 96-луночные или 384-луночные планшеты. Если отсортированная популяция составляет от 10% до 99% от исходной популяции, следует использовать конические центрифужные пробирки на 15 мл. Они должны быть заполнены 5 мл сортировочных сборщиков (см. Информацию в предыдущем разделе этой страницы). Если отсортированная популяция составляет менее 10% от исходной, то пробирки для сбора на 15 мл должны быть заполнены 10-13 мл среды или 12 пробирок x 75, используемых с несколькими миллилитрами среды.При сортировке в 96-луночные планшеты перед сортировкой в каждую лунку следует поместить 100-200 мкл (рекомендуется 200 мкл) среды.
Вращение 96-луночных планшетов после сортировки в течение 30-60 секунд при 300xG поможет клеткам прилипнуть к планшету и увеличит количество колоний, которые будут расти.
Отсортированные клетки перемещаются в виде капель, состоящих из оболочки жидкости, по пути к пробирке для сбора сортировки. После того, как клетки попали в сосуд для сбора, они смешиваются с жидкостью оболочки из капель и культуральной средой, помещенной в пробирку для сбора. Существует 3 варианта оболочки жидкости, которую можно использовать в FACS Aria или FACS Fusion:
Жидкости для оболочки, поставляемые обоими предприятиями, в основном представляют собой PBS с противогрибковым / антибактериальным консервантом (Proclin 300) или без него.Большинство типов клеток переносят воздействие консервирующей жидкости оболочки и процветают после сортировки. Некоторые клетки, такие как стволовые клетки человека и дендритные клетки человека, не переносят воздействия и имеют тенденцию быстро погибать. В экспериментах, где клетки могут не переносить воздействие консервирующей жидкости для оболочки, мы рекомендуем заменять ее либо не содержащей консервантов жидкостью для оболочки, поставляемой Facility, либо 1X PBS. Чтобы дать достаточно времени для подготовки прибора с использованием 1X PBS, лаборатория, запрашивающая сортировку, должна принести 4-10 литров для FACS Aria или FACS Fusion на объект за день до сортировки.Сумма, необходимая для сортировки, будет зависеть от запланированного времени. Проконсультируйтесь с одним из сотрудников учреждения по поводу необходимого количества PBS.
Сохранение высококачественной РНК для секвенирования после сортировки в фиксированных клетках может быть достигнуто с использованием протокола фиксации цинкового буфера.
В информации, опубликованной 27 марта 2019 г. на доске объявлений проточной цитометрии, управляемой Purdue, доктором Роксаной дель Рио-Герра говорится:
«Мы, (ABRF-) Исследовательская группа по проточной цитометрии, только что представили нашу работу на последней встрече ABRF (плакат 129) о различных методах фиксации (включая коммерчески доступные продукты для этой цели) и чистоте, качестве и выходе РНК после сортировка ячеек. Мы протестировали: параформальдегид (2 и 4%), формальдегид (1 и 4%), спирты (этанол и метанол), цинковый буфер, а также коммерчески доступные наборы, такие как CytoFix / Cyto perm и FACSLyse (от BD) и IC исправить / разрешить буфер (eBio / ThermoFis). Каждый из этих протоколов был выполнен двумя различными основными лабораториями Flow в двух разных учреждениях, и все образцы были отправлены в общую лабораторию для оценки целостности / количества РНК. Среди всех этих протоколов протокол цинкового буфера (Christensen, R, et al.Curr Protoc Cytom 2011, Глава 7: Модуль 7.40. PMID: 21732310) дал нам очень многообещающие результаты с показателем целостности РНК, близким к 8,0. Для нашей работы мы сначала окрашивали клетки только красителем жизнеспособности, а затем фиксировали-сортируем-фиксируем ».
В последующем сообщении д-р дель Рио-Герра добавляет –
“Кроме того, по ссылке Curr Prot Cyt, мы изменили ацетат цинка на 17,16 мМ трифторацетат цинка, поскольку было показано, что это лучше сохраняет качество РНК (ссылка PMID: 17576663). упомянутые дифффиксанты), отсортированные клетки собирали на RLT плюс буфер (Qiagen 1053393).За исключением Zn-буфера, качество РНК было очень низким. Результаты, представленные на последнем заседании ABRF, являются предварительными, но протокол Zn-буфера был воспроизводимым в двух различных основных лабораториях и с лучшим качеством РНК. Мы продолжим работу над этим проектом ».
Если у вас есть доступ к текущим протоколам цитометрии, вы можете получить доступ к протоколу фиксации цинкового буфера напрямую. По запросу центр проточной цитометрии может предоставить протокол в формате PDF.
По возможности следует избегать ресуспендирования клеток, подлежащих анализу, в среде, содержащей фенил красный.Фениловый красный может усиливать фоновую флуоресценцию клеток.
Ячейки являются неравновесными структурами и требуют постоянного снабжения энергией, чтобы оставаться в этом привилегированном состоянии. Измерение количества энергии, необходимой для работы клетки, или количества тепла, выделяемого при нормальных метаболических процессах, является экспериментально сложной задачей.Помимо проблем, связанных с фактическим измерением энергопотребления сотовой связи, существует несколько правдоподобных определений скорости использования энергии сотой, что делает тщательное обсуждение проблемы еще более сложным. Мы объясним значение и актуальность некоторых из этих определений, а затем воспользуемся оценками и отчетными измерениями, чтобы изучить их значения по порядку величины. Мы не стремимся к высокой точности, поскольку эти значения могут легко отличаться более чем на порядок в зависимости от того, какая питательная среда используется, скорость роста и другие факторы окружающей среды.
Рисунок 1: Расчет на оборотной стороне конверта, оценивающий скорость производства энергии у человека и бактериальной клетки
Для нашей первой оценки мы используем эмпирическое правило, согласно которому взрослый человек выделяет тепло мощностью около 100 Вт (напомним, что 100 Вт = 100 Дж / с), аналогично яркой лампочке накаливания, которая подтверждается, замечая насколько тепло становится комната по мере того, как в нее набивается больше людей. Значение 100 Вт было рассчитано на основе потребления калорий в 2000 ккал в день в виньетке «Какая свободная энергия выделяется при сгорании сахара?».Предполагая, что человек имеет массу ≈100 кг (давайте на время забудем о нашей недавней диете после праздников – это оценка порядка величины), мы обнаружим, что потребляемая мощность составляет около 1 Вт / кг, как показано на Рисунке 1. Это значение составляет примерно 10 -15 Вт / мкм 3 , где мы возвращаемся к этой полезной единице объема, помня, что бактерия имеет объем примерно 1 мкм 3 , эритроцит имеет объем примерно 100 мкм 3 , а прилипшая клетка млекопитающего имеет объем в диапазоне от 1000 до 10000 мкм 3 .Используемое здесь определение энергопотребления основано на скорости производства тепла. Ниже мы рассмотрим другие определения.
Недавние измерения потребления глюкозы в первичных фибробластах человека позволяют рассмотреть вторую оценку потребления энергии человеком. Было обнаружено, что покоящиеся человеческие фибробласты неизвестного объема потребляют около 1 ммоль глюкозы на грамм белка в час (BNID 111474). Напомним, что общая энергия, выделяемая при сгорании глюкозы (когда углерод из сахара объединяется с кислородом с образованием CO 2 и воды), составляет около 3000 кДж / моль, как обсуждается в виньетке на тему «Какая свободная энергия выделяется при сгорании сахар? ».Содержание белка в характерном объеме клеток 3 3000 мкм составляет около 300 пг, что соответствует 3 × 10 9 клеток на грамм белка. Таким образом, для одной ячейки требуется
(3 × 10 6 Дж / моль глюкозы) x (10 -3 моль глюкозы / (г белка x час) x (1 час / 3600 сек) x (1 г белка / 3 × 10 9 клеток) ) = 3 × 10 -10 Вт / элемент.
На основе массы это эквивалентно 3 × 10 -10 Вт / элемент x 3 × 10 11 элементов / кг ≈ 100 Вт / кг сырого веса элемента, что на два порядка выше, чем наша оценка, основанная на анализ всего человеческого тела. Возможно, фибробласты более метаболически активны, чем средняя клетка человека. В качестве альтернативы, это расхождение на два порядка величины может поставить под сомнение точность представленных значений. Без дополнительных данных сложно сказать. Хотя мы озадачены этим результатом, он прекрасно фокусирует наше внимание на конкретном научном вопросе о потреблении энергии фибробластами, выращенными в лаборатории, по сравнению со «средней» клеткой в организме человека, и мотивирует будущие эксперименты и измерения.
Иногда более полезно думать в единицах энергии АТФ.Мы можем предположить ≈20 АТФ, продуцируемых на молекулу глюкозы в сочетании дыхания и ферментации, характерных для раковых клеток (BNID 111475). Затем мы обнаружили, что рассчитанное выше потребление соответствует примерно 10 9 АТФ / с / клетка млекопитающего с объемом 3000 мкм 3 (BNID 111476). Для чего полезно знать это значение?
Рисунок 2: Расчет обратной стороны конверта потребности в АТФ для подвижности клетки. Нити актина пересекают передний край подвижного кератоцита, и их динамическая полимеризация приводит к чистому поступательному движению со скоростью 0.2 мкм / с. (Электронные микрофотографии адаптированы из T. M. Svitkina et al., J. Cell Biol. 139: 397, 1997.)
Давайте подумаем о подвижности клеток. Когда мы смотрим видео, как кератоциты быстро перемещаются через поле зрения микроскопа на их ламеллиподии, как показано на рисунке 2, естественно предположить, что эти процессы требуют большой доли энергии, доступной этим клеткам. Но так ли это на самом деле? Для многих эукариотических клеток подвижность обусловлена в первую очередь динамической полимеризацией актина при постоянной стоимости примерно 1 гидролиза АТФ на полимеризуемый мономер актина.Известно, что метка актина флуоресцентно показала, что актиновые филаменты в движущихся эпителиальных кератоцитах золотой рыбки полимеризуются с той же скоростью, что и движущиеся клетки, примерно 0,2 мкм / с при комнатной температуре, как показано на рисунке 2 (BNID 111060). Учитывая размер мономера актина, каждая нить должна расти примерно на 100 мономеров / с, чтобы поддерживать подвижность, что стоит ≈100 АТФ на полимеризуемую нить в секунду. Но сколько актиновых филаментов необходимо для перемещения клетки? Как показано на Рисунке 2, передний край ламеллиподиума кератоцита золотой рыбки имеет длину около 20 мкм и содержит примерно 200 актиновых нитей на микрон длины (BNID 111061), или всего ≈4000 нитей.Если актин полимеризуется в основном на переднем крае ламеллиподии, кератоцит должен сжигать около 4000 × 100 = 4 × 10 5 АТФ / с, чтобы обеспечить свое движение. В свете потребления АТФ клеткой, рассчитанного выше, это значение оказывается очень незначительным требованием АТФ – менее десятой доли процента. Приложив усилия для расчета этих энергетических затрат, мы уточнили наше понимание энергетического бюджета клеток.
Как результаты, описанные выше для людей, соотносятся с тем, что мы можем сказать о потреблении энергии бактериями? Эмпирический подход основан на отслеживании скорости потребления кислорода клетками (которая, конечно, зависит от источника углерода и условий роста). Для роста на минимальной среде с глюкозой характерное значение скорости потребления кислорода составляет 30 ммоль O 2 / г массы сухих клеток / час (BNID 109687). Выполнив необходимые преобразования единиц, отметив, что дыхание кислорода выделяет 500 кДж / моль O 2 тепла, как описано в виньетке «Какая свободная энергия выделяется при сгорании сахара?», Мы находим, как показано на рис. 1, 10 -12 Вт / элемент = 1000 Вт / кг. Мы пришли к выводу, что в этих стандартных условиях потребление энергии бактериями на единицу биомассы примерно на три порядка выше, чем у человека.Читателю, интересующемуся схожими тенденциями у разных организмов и попытками их рационализировать, предлагается посетить следующий эпизод на тему «Как скорость метаболизма зависит от размера?». Точно так же, чтобы увидеть, как это соотносится с энергетическими потребностями подвижности бактерий, обратитесь к виньетке на тему «Какова частота вращающихся молекулярных двигателей?».
Далее мы анализируем быстрый рост бактерий с точки зрения использования АТФ. Мы используем, как это было сделано выше, потребность в кислороде 30 ммоль O 2 / час / г сухого веса во время роста на глюкозе, и теперь используем это значение с помощью так называемого отношения P / O, которое представляет собой отношение производимого АТФ к количеству кислорода. атом вдыхал (равно примерно 2, т.е.е. 3-5 АТФ на 1 молекулу O 2 , BNID 111461, 110656, 110628). Таким образом, мы получаем около 100 ммоль АТФ / час / г сухого веса, что соответствует ~ 10 7 АТФ / с / бактериальная клетка. На протяжении клеточного цикла, занимающего около часа, это приводит к продуцированию 10 10 -10 11 АТФ на 1 мкм бактериальную клетку в объеме 1 мкм 3 объема. Отметив, что один час также является характерным временем удвоения, в течение которого каждая клетка производит новую клетку, содержащую около 10 10 атомов углерода (BNID 103010), мы имеем практическое правило примерно 1 АТФ на 1 углерод, включенный в биомассу во время роста клетки. Чем полезны эти числа? Рассмотрим идею питания клетки E. coli с использованием бактериального протеородопсина, мембранного белка, который находится в клеточной мембране некоторых типов бактерий и качает протоны при воздействии света (обсуждается в JM Walter и др., Proc. Nat. Acad. Sci.104: 2408, 2007). Можно представить себе упаковку порядка 10 5 таких белков на доступном пространстве «стандартной» бактериальной мембраны (но фактические значения, как правило, намного ниже, BNID 111296).Мы можем сделать вывод, что для деления каждые несколько часов (скажем, 10 4 с), как и ожидается от бактерий, каждый из этих мембранных белков должен будет перекачивать протон несколько сотен раз в секунду (по крайней мере, ~ 10 11 протонов необходимо из 10 5 белков на 10 4 с). Затем эти протоны будут использоваться для питания машин, синтезирующих АТФ. Если эти белки не могут поддерживать такую скорость переноса или упаковка такого большого количества белков на мембране невозможна, обеспечение метаболизма клетки с самого начала будет бесполезным (BNID 111295).
Какие процессы подпитываются всем этим потреблением энергии в клетках? В 1970-х годах предпринимались попытки выполнить «учет АТФ» для бактериальных клеток – составить список всех процессов в клетках в зависимости от того, сколько АТФ они потребляют. Из процессов, которые можно было четко определить количественно (включая метаболизм и полимеризацию), синтез белка из аминокислот преобладал в бюджете при высокой скорости роста и предпочтительных источниках углерода. Полимеризация аминокислоты в зарождающуюся пептидную цепь потребляет около 4 АТФ / аминокислоту, а с 2-4 миллионами белков на мкм 3 и 300 аминокислот на белок мы получаем примерно 4 × 10 9 АТФ, израсходованных на мкм 3 объема ячейки.Это следует сравнить со значением 10 10 -10 11 в предыдущем абзаце. Мы пришли к выводу, что это большая утечка энергии, но более удивительно то, что большая часть, составляющая примерно половину измеренной используемой энергии (BNID 102605), не учитывается каким-либо процессом, необходимым для накопления ячеек, и обычно считалась потерянной. в мембранных процессах нарастания и утечки мембранного потенциала. Пересмотр этих заброшенных попыток клеточного учета представляет большой интерес, например, определение фракции, потерянной из-за бесполезных метаболических циклов и посттрансляционного фосфорилирования и дефосфорилирования белков.
Таблица 1: Распределение основных процессов потребления кислорода по общему уровню потребления кислорода тканями в нормальном состоянии (BNID 107962). Значения округляются до одной значащей цифры. Адаптировано из: Использование клеточной энергии и молекулярное происхождение стандартной скорости метаболизма у млекопитающих. Rolfe & Brown, Физиологические обзоры, 1997.
Пытаясь выполнить аналогичный учет для клеток млекопитающих, ответ снова зависит от условий роста, соответствующей ткани и т. Д. В таблице 1 (BNID 107962) мы воспроизводим результаты для тканей мыши, показывающие основной вклад синтеза белка, Na + / K + АТФаза (машина, отвечающая за поддержание электрического потенциала покоя в клетках), актиномиозиновая АТФаза (которая управляет мышечными клетками) и утечка митохондриальных протонов.